Bitamina A sa dugo

Mga halaga ng sanggunian (pamantayan) para sa konsentrasyon ng bitamina A (retinol) sa serum ng dugo: sa mga bata 1-6 taong gulang - 0.7-1.5 μmol/l, 7-12 taong gulang - 0.91-1.71 μmol/l, 13-19 taong gulang - 0.91-2.51 μmol/l; sa mga matatanda - 1.05-2.09 μmol / l.

Ang bitamina A ay isang bitamina na nalulusaw sa taba at umiiral sa dalawang anyo: ang bitamina A mismo, o retinol (matatagpuan lamang sa mga produktong hayop), at provitamin A, na kilala bilang carotene (nakuha mula sa mga produktong hayop at halaman), na maaaring ma-convert sa retinol sa mga dingding ng digestive tract. Humigit-kumulang 50-90% ng dietary retinol ay nasisipsip sa maliit na bituka at dinadala sa isang chylomicron-bound complex sa atay, kung saan ito ay nakaimbak bilang retinol palmitate. Kapag kinakailangan, ito ay inilalabas sa daluyan ng dugo bilang retinol complex na may bitamina A-binding protein. Sa serum ng dugo, ang bitamina A-binding protein + retinol complex ay nagbubuklod sa transthyretin. Mula sa serum ng dugo, ang retinol ay kinukuha ng mga target na selula, tulad ng mga photoreceptor ng retina at ng epithelium.

Kapag ang katawan ay tumatanggap ng bitamina A sa mga dami na lumampas sa mga kinakailangan (180-430 mcg ng retinol bawat araw depende sa edad, kasarian at pisyolohikal na estado), ang labis nito ay idineposito sa atay, na bumubuo ng isang depot ng bitamina na ito. Kapag ang paggamit ng retinol na may pagkain ay nabawasan, ang mga reserba nito mula sa atay ay inilabas sa daloy ng dugo, na pinapanatili ang konsentrasyon ng retinol sa serum ng dugo sa isang normal na antas (sa itaas 0.7 μmol / l). Ang iba pang biologically active forms ng bitamina A (retinal at retinoic acid) ay naroroon sa dugo sa napakababang konsentrasyon (sa ibaba 0.35 μmol/l); Ang mga retinol ester ay humigit-kumulang 5% ng kabuuang bitamina A (0.1-0.17 μmol/l).

Ang bitamina A ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa mga proseso ng pagbabawas ng oksihenasyon. Itinataguyod ng Retinol ang pagbuo ng glycogen sa atay at mga kalamnan, nakakatulong na mapataas ang nilalaman ng kolesterol sa dugo, at nakikilahok sa synthesis ng steroid at mga sex hormone. Ito ay kinakailangan para sa paglaki at pagbuo ng skeletal system, rhodopsin resynthesis, at itinataguyod din ang normal na paggana ng mga mucous membrane at ang integumentary epithelium ng balat, na pinipigilan ang metaplasia, hyperkeratosis, at labis na sloughing. Tinutulungan ng bitamina A na palakasin ang buhok, ngipin, at gilagid. Sa mga nagdaang taon, ang magkakaibang papel na ginagampanan ng bitamina A sa pag-iwas sa kanser at pag-regulate ng kaligtasan sa sakit ay ipinakita (kinakailangan para sa pagkumpleto ng phagocytosis, pinatataas ang synthesis ng Ig, pinasisigla ang pagbuo ng mga T-killer, pinasisigla ang type II T-helpers, atbp.). Ang bitamina A ay isang aktibong antioxidant, pangunahing kumikilos sa pagkakaroon ng bitamina E; pinoprotektahan nito ang bitamina C mula sa oksihenasyon. Ang kakulangan sa bitamina A ay itinuturing na isang panganib na kadahilanan para sa mga malignant neoplasms. Ipinakita ng mga eksperimentong pag-aaral na ang pagtaas ng nilalaman ng bitamina A sa diyeta ay nagpapataas ng median na pag-asa sa buhay ng 17.5%. Ang zinc ay isang mahalagang cofactor sa metabolismo ng bitamina A (kinakailangan para sa synthesis ng bitamina A-binding protein).

Ang average na pang-araw-araw na kinakailangan para sa retinol para sa mga nasa hustong gulang (20-50 taon) ay 1.2 mg (4000 IU, 1 IU ay katumbas ng 0.3 mcg ng retinol), para sa mga buntis na kababaihan - 1.5 mg (5000 IU), para sa mga babaeng nagpapasuso - 1.8 mg (6000 IU), para sa mga taong higit sa 6000 IU (20.50 mg). Hindi bababa sa isang katlo ng pang-araw-araw na pangangailangan para sa retinol ay dapat ibigay sa katawan sa tapos na anyo; ang natitira ay maaaring sakop ng pagkonsumo ng mga carotenoids, kung saan nabuo ang retinol sa katawan. Dapat itong isaalang-alang na humigit-kumulang 30% ng retinol sa mga produktong pagkain ay nawasak sa panahon ng paggamot sa init. Ang aktibidad ng retinol ay 2 beses na mas mataas kaysa sa karotina, bilang karagdagan, 30-40% lamang ng huli ang nasisipsip sa bituka. Samakatuwid, kapag tinatasa ang diyeta, pinaniniwalaan na ang 1 mg ng retinol ay humigit-kumulang katumbas ng 6 mg ng carotenoids.

Pagpapasiya ng retinol (bitamina A) at carotenoids sa serum ng dugo ayon kay Bessey na binago ni LA Anisimova

Prinsipyo ng pamamaraan

Ang pagpapasiya ng bitamina A at carotenoids ay batay sa kanilang hydrolysis sa isang alkaline na solusyon sa alkohol na sinusundan ng pagkuha na may pinaghalong mga organikong solvent.

Mga reagents

• 11 M potassium hydroxide (KOH) na solusyon.
• 96% ethyl alcohol.
• 1 M potassium hydroxide (KOH) solution sa 96% ethyl alcohol: 1 volume ng 11 M KOH solution ay hinaluan ng 10 volume ng 96% ethyl alcohol. Ang reagent ay inihanda sa araw ng pag-aaral. Kung ang kulay ay nangyayari sa panahon ng paghahalo, ang alkohol ay dapat na dalisayin sa pamamagitan ng distillation bago gamitin.
• Xylene, puro kemikal
• Octane, puro kemikal
• Xylene-octane mixture: inihanda sa pamamagitan ng paghahalo ng pantay na dami ng xylene at octane.

Ang mga pag-aaral ay isinasagawa gamit ang isang spectrophotometer.

Ang proseso ng pagtukoy ng bitamina A

Ang dugo na kinuha mula sa daliri (mga 1 ml) ay inilalagay sa isang centrifuge tube at inilagay sa isang basong baso na may maligamgam na tubig (temperatura 40-45° C) sa loob ng 20-30 minuto. Upang paghiwalayin ang suwero, ang namuong dugo ay maingat na iginuhit sa paligid ng gilid ng mga dingding ng tubo na may manipis na baras ng salamin at sentripuge sa 3000 rpm sa loob ng 10 minuto.

Ang 0.12 ml ng serum ay nakolekta at inilipat sa isang agglutination tube, kung saan ang 0.12 ml ng 1 M potassium hydroxide alcohol solution ay idinagdag. Ang nilalaman ay inalog mabuti.

Ang mga test tube na may mga sample ay inilalagay sa isang paliguan ng tubig sa loob ng 20 minuto sa temperatura na 60° C upang maisagawa ang hydrolysis.

Ang mga sample ay pinalamig at 0.12 ml ng xylene-octane mixture ay idinagdag sa kanila, at sila ay inalog nang malakas sa loob ng 10-15 s. Ang mga ito ay pinalamig muli at na-centrifuge.

Ang itaas na layer na naglalaman ng bitamina A at carotenoids ay maingat na tinanggal gamit ang isang Pasteur pipette na may isang goma na bombilya at inilipat sa microcuvettes.

Ang mga sample ay spectrophotometered sa wavelength na 328 nm upang matukoy ang bitamina A, at sa wavelength na 460 nm upang matukoy ang mga carotenoids.

Pagkatapos ng spectrophotometry, ang mga sample ay nakalantad sa ultraviolet radiation upang sirain ang bitamina A. Para sa layuning ito, ang isang quartz (bactericidal) na lampara ay naka-install sa layo na 15-20 cm mula sa microcuvettes upang ang bahagi ng cuvette na puno ng likido ay nakalantad sa radiation; ang oras ng pag-iilaw ay 45-60 min.

Ang mga sample ay re-spectrophotometered sa wavelength na 328 nm. Ang nilalaman ng bitamina A ay tinutukoy ng pagkakaiba sa mga halaga ng pagkalipol (optical density) na isinasaalang-alang ang coefficient (factor) 637 na kinakalkula ni Bessey para sa bitamina A.

Ang pagkalkula ay isinasagawa ayon sa pormula:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kung saan ang X ay ang nilalaman ng bitamina A, μg/dl; Ang 637 ay ang koepisyent na kinakalkula ni Bessey para sa pagtukoy ng bitamina A; Ang E328(1) ay ang optical density ng solusyon bago ang pag-iilaw; Ang E328(2) ay ang optical density ng solusyon pagkatapos ng pag-iilaw.

Ang koepisyent para sa pag-convert ng konsentrasyon ng bitamina A mula sa µg/dL sa µmol/L ay 0.035.

Ang nilalaman ng carotenoids ay kinakalkula gamit ang formula:

X = 480-E480,

Kung saan ang X ay ang nilalaman ng carotenoid, μg/dl; Ang 480 ay ang coefficient na kinakalkula ni Bessey para sa pagtukoy ng mga carotenoids; Ang E480 ay ang optical density ng solusyon sa pagsubok.

Tandaan

Ayon kay Bessey, ang isang mas malaki o mas maliit na dami ng serum ay maaaring gamitin kapag nagsasagawa ng pananaliksik, ngunit ang ratio nito sa dami ng solusyon sa alkohol ay dapat na pare-pareho sa anumang pagbabago sa dami (dami) ng xylene-octane mixture.

Ang normal na nilalaman ng bitamina A sa serum ng dugo ay: sa mga bagong silang at mga sanggol - 160-270 μg / l; sa mga matatanda - 1.05-2.45 μmol / l (300-700 μg / l). Ang nilalaman ng carotenoids sa serum ng dugo ng mga matatanda ay 800-2300 μg / l.