PCR bilang paraan ng pag-diagnose ng mga sakit sa genetiko

Ang PCR ay isang bagong tagumpay sa molecular genetics, na ginagamit para sa paglaki ng DNA at pinahihintulutan ang tiyak na bahagi ng DNA (iyon ay, anumang gene ng interes) ay mabilis na kinokopya sa vitro nang higit sa 200,000 beses. Upang maisakatuparan ang reaksyon, ito ay sapat upang magkaroon ng materyal na DNA ng isang cell; Ang dami ng DNA na amplified ng PCR ay napakahusay na ang DNA na ito ay maaari lamang maging marumi (gamit ang radioactive probes pagkatapos ng electrophoresis ay hindi kinakailangan). Ang isang paunang kinakailangan para sa pagsasagawa ng PCR ay ang kaalaman sa sequence ng nucleotide ng amplified DNA region para sa wastong pagpili ng artipisyal na synthesized primers.

Sa kasalukuyan, PCR ay isang proseso na nangyayari sa isang solong tube at binubuo ng paulit-ulit na mga cycles ng paglaki (paggawa ng maraming kopya, kopya) ng mga tiyak na pagkakasunud-sunod DNA sa pagkakasunud-sunod upang makakuha ng isang sapat na malaking bilang ng mga kopya na maaaring kinilala sa pamamagitan ng electrophoresis. Isang pangunahing bahagi ng reaksyon - "primers" - synthetic oligonucleotides na binubuo ng 20-30 base ng mga pantulong na "Site" (lugar) pagsusubo (koneksyon) sa na nakakapagpakilalang bahagi ng template DNA.

Ang PCR ay awtomatikong nalikom sa isang programmable termostat - thermocycler (thermocycler). Ang tatlong hakbang na pag-ikot, bilang isang resulta kung saan ang eksaktong mga kopya ng nakikilalang bahagi ng template DNA ay nakuha, ay paulit-ulit na 30-50 beses alinsunod sa preset na programa ng thermocycler. Sa unang pag-ikot, ang mga oligopramer ay nagpapabagal sa orihinal na template DNA, at pagkatapos (sa kasunod na mga pag-ikot) at sa mga bagong synthesize ng mga molecule ng DNA habang nakakaipon sila sa halo ng reaksyon. Sa huli, ang pagbubuo ng DNA ay hindi nagtatapos dahil sa isang pagbabago sa temperatura ng rehimen, ngunit sa pag-abot sa DNA polymerase hangganan ng amplified na rehiyon, na tumutukoy sa laki ng bagong synthesize na rehiyon ng DNA sa loob ng isang nucleotide.

Bilang isang paraan ng pag-detect ng nakuha molekula ng DNA, ang electrophoresis ay ginagamit, sa pamamagitan ng kung saan ang amplified na materyal ay hinati ayon sa laki ng mga amplicons (mga produkto ng paglaki).

Sa tulong ng PCR, posibleng direktang siyasatin ang mga site ng lokalisasyon ng mga pinaghihinalaang mutations o polymorphic na mga site, at din upang pag-aralan ang pagkakaroon ng anumang iba pang tiyak na mga tampok ng DNA.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]