PCR bilang isang paraan ng pag-diagnose ng mga genetic na sakit

Ang PCR ay isang bagong tagumpay ng molecular genetics, na ginagamit para sa DNA amplification at nagbibigay-daan sa mabilis na in vitro multiplication ng isang partikular na rehiyon ng DNA (ibig sabihin, anumang gene ng interes) nang higit sa 200,000 beses. Upang maisagawa ang reaksyon, sapat na magkaroon ng materyal na DNA mula sa isang cell; ang dami ng DNA na pinalakas ng PCR ay napakalaki na ang DNA na ito ay mabahiran lang (hindi kailangan ang paggamit ng radioactive probes pagkatapos ng electrophoresis). Ang isang paunang kinakailangan para sa pagsasagawa ng PCR ay ang kaalaman sa pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng amplified na rehiyon ng DNA para sa tamang pagpili ng mga artipisyal na synthesize na primer.

Sa kasalukuyan, ang PCR ay isang single-tube na proseso na binubuo ng paulit-ulit na mga cycle ng amplification (pagpaparami, pagkopya) ng isang tiyak na pagkakasunud-sunod ng molekula ng DNA upang makakuha ng sapat na malaking bilang ng mga kopya na maaaring makilala ng electrophoresis. Ang isa sa mga pangunahing bahagi ng reaksyon ay ang "primer" - sintetikong oligonucleotides na binubuo ng 20-30 base na pantulong sa "mga site" (mga lugar) ng pagsusubo (attachment) sa natukoy na lugar ng matrix DNA.

Awtomatikong nangyayari ang PCR sa isang programmable thermostat - isang thermal cycler (amplifier). Ang tatlong yugto na cycle, na nagreresulta sa eksaktong mga kopya ng natukoy na seksyon ng matrix DNA, ay inuulit ng 30-50 beses alinsunod sa tinukoy na programa ng thermal cycler. Sa unang cycle, ang mga oligoprimer ay nagha-hybrid sa orihinal na matrix na DNA, at pagkatapos (sa mga susunod na cycle) sa mga bagong synthesize na molekula ng DNA habang sila ay nag-iipon sa reaction mixture. Sa huling kaso, ang synthesis ng DNA ay nagtatapos hindi bilang isang resulta ng isang pagbabago sa temperatura, ngunit sa pag-abot sa limitasyon ng DNA polymerase ng amplified na seksyon, na tumutukoy sa laki ng bagong synthesize na seksyon ng DNA na may katumpakan ng isang nucleotide.

Ang electrophoresis ay ginagamit bilang isang paraan para sa pag-detect ng nakuha na mga molekula ng DNA, sa tulong ng kung saan ang amplified na materyal ay pinaghihiwalay ayon sa laki ng mga amplicons (mga produkto ng amplification).

Maaaring gamitin ang PCR upang direktang suriin ang mga lokasyon ng mga pinaghihinalaang mutasyon o polymorphic na mga site, gayundin upang pag-aralan ang pagkakaroon ng anumang iba pang partikular na katangian ng DNA.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]