Karyotyping

Ang mga panandaliang kultura ng dugo, mga selula ng utak ng buto, at mga kultura ng fibroblast ay kadalasang ginagamit upang pag-aralan ang mga kromosom. Ang dugo na may isang anticoagulant na inihatid sa laboratoryo ay ini-centrifuged sa sediment ng mga erythrocytes, at ang mga leukocytes ay ini-incubated sa isang medium ng kultura sa loob ng 2-3 araw. Ang phytohemagglutinin ay idinagdag sa sample ng dugo, dahil pinabilis nito ang agglutination ng mga erythrocytes at pinasisigla ang paghahati ng lymphocyte. Ang pinaka-angkop na yugto para sa pag-aaral ng mga kromosom ay ang metaphase ng mitosis, kaya ang colchicine ay ginagamit upang ihinto ang paghahati ng mga lymphocytes sa yugtong ito. Ang pagdaragdag ng gamot na ito sa kultura ay humahantong sa isang pagtaas sa proporsyon ng mga cell sa metaphase, iyon ay, sa yugto ng cell cycle kapag ang mga chromosome ay pinaka nakikita. Ang bawat chromosome ay nagrereplika (gumawa ng sarili nitong kopya) at, pagkatapos ng naaangkop na paglamlam, ay makikita bilang dalawang chromatid na nakakabit sa centromere, o central constriction. Ang mga cell ay ginagamot sa isang hipotonic sodium chloride solution, naayos, at nabahiran.

Para sa mga chromosome na pangkulay, ang Romanovsky-Giemsa dye, 2% acetcarmine o 2% acetarsein ay kadalasang ginagamit. Kinulayan nila ang mga kromosom nang buo, pantay-pantay (nakagawiang pamamaraan) at maaaring magamit upang makita ang mga numerical na anomalya ng mga kromosom ng tao.

Upang makakuha ng isang detalyadong larawan ng istraktura ng chromosome, tukuyin (tukuyin) ang mga indibidwal na chromosome o ang kanilang mga segment, iba't ibang mga paraan ng differential staining ang ginagamit. Ang pinakakaraniwang ginagamit na mga pamamaraan ay Giemsa, pati na rin ang G- at Q-banding. Kapag sinusuri ang paghahanda ng mikroskopya sa kahabaan ng chromosome, ang isang bilang ng mga stained (heterochromatin) at unstained (euchromatin) bands ay ipinahayag. Ang likas na katangian ng transverse striation na nakuha sa ganitong paraan ay nagbibigay-daan sa pagtukoy sa bawat chromosome sa set, dahil ang paghalili ng mga banda at ang kanilang mga sukat ay mahigpit na indibidwal at pare-pareho para sa bawat pares.

Ang mga metaphase plate ng indibidwal na mga cell ay nakuhanan ng larawan. Ang mga indibidwal na chromosome ay pinutol mula sa mga litrato at idinidikit sa isang sheet ng papel; ang larawang ito ng mga chromosome ay tinatawag na karyotype.

Ang paggamit ng karagdagang paglamlam, pati na rin ang mga bagong pamamaraan para sa pagkuha ng mga paghahanda ng chromosomal na nagpapahintulot sa mga chromosome na ma-stretch ang haba, ay makabuluhang pinatataas ang katumpakan ng mga diagnostic ng cytogenetic.

Ang isang espesyal na nomenclature ay binuo upang ilarawan ang karyotype ng tao. Ang normal na karyotype ng isang lalaki at isang babae ay itinalaga bilang 46, XY at 46, XX, ayon sa pagkakabanggit. Sa Down syndrome, na nailalarawan sa pagkakaroon ng karagdagang chromosome 21 (trisomy 21), ang karyotype ng isang babae ay inilarawan bilang 47, XX 21+, at ang karyotype ng isang lalaki ay 47, XY, 21+. Sa pagkakaroon ng structural anomalya ng chromosome, kinakailangang ipahiwatig ang binagong mahaba o maikling braso: ang titik p ay tumutukoy sa maikling braso, q ay tumutukoy sa mahabang braso, at t ay tumutukoy sa pagsasalin. Kaya, sa kaso ng pagtanggal ng maikling braso ng chromosome 5 (cri du chat syndrome), ang babaeng karyotype ay inilarawan bilang 46, XX, 5p-. Ang ina ng isang bata na may translocation Down syndrome, isang carrier ng balanseng translocation 14/21, ay may karyotype na 45, XX, t(14q; 21q). Ang translocation chromosome ay nabuo sa pamamagitan ng pagsasanib ng mahahabang braso ng chromosome 14 at 21, at ang mga maikling braso ay nawala.

Ang bawat braso ay nahahati sa mga rehiyon, na kung saan ay nahahati sa mga segment, na parehong itinalaga ng Arabic numeral. Ang sentromere ng chromosome ay ang panimulang punto para sa pagbibilang ng mga rehiyon at mga segment.

Kaya, apat na label ang ginagamit para sa chromosome topography: chromosome number, arm symbol, region number, at segment number sa loob ng rehiyon. Halimbawa, ang entry 6p21.3 ay nangangahulugan na pinag-uusapan natin ang chromosome 6 ng ika-6 na pares, ang maikling braso nito, rehiyon 21, segment 3. Mayroon ding mga karagdagang simbolo, sa partikular na pter - ang dulo ng maikling braso, qter - ang dulo ng mahabang braso.

Ang cytogenetic na paraan ng pananaliksik ay nagpapahintulot sa pagtuklas ng mga pagtanggal at iba pang mga pagbabago sa mga chromosome lamang ng humigit-kumulang 1 milyong base (nucleotides) ang laki.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]