Diagnosis ng herpes

Ang diagnosis ng herpes ay batay sa classical virus isolation sa mga sensitibong cell culture, immunofluorescence at serological na pamamaraan, colposcopic examination, at ang paggamit ng modernong molecular biological method (PCR, dot hybridization), na nagbibigay-daan sa pag-diagnose ng buong grupo ng herpes virus, kabilang ang HHV-6 at HHV-7 na mga uri.

Mga pamamaraan ng diagnostic sa laboratoryo para sa impeksyon sa herpes

Ang mga pangunahing pamamaraan na naglalayong ihiwalay ang HSV o pag-detect ng mga partikulo ng viral at/o mga bahagi nito	Mga pantulong na pamamaraan na naglalayong makita ang mga antibodies sa HSV sa mga biological fluid ng katawan ng tao
Paghihiwalay ng HSV sa mga sensitibong selula at kultura ng hayop Direkta at immune electron microscopy Direkta at hindi direktang mga variant ng IPA IFA Molecular biological na pamamaraan Latex agglutination reaksyon	Reaksyon ng neutralisasyon RSC Pagpapasiya ng mga antibodies sa mga non-structural na protina ng HSV-1,2

Ito ay ipinapakita na sa 76% ng mga pasyente genital herpes (GH) ay sanhi ng HSV-2, at sa 24% - sa pamamagitan ng HSV-1 uri. Bukod dito, ang GH bilang isang monoinfection ay naganap lamang sa 22% ng mga pasyente, sa 78% ng mga kaso ay nakita ang mga asosasyon ng microbial. Sa 46% ng mga indibidwal, ang parasitocenosis na dulot ng dalawang pathogen ay nakita, kabilang ang chlamydia ay nakita sa 40% ng mga kaso. Ang Gardnerella, Trichomonas, at gonococci ay hindi gaanong madalas na nakita sa mga pahid.

Sa 27% ng mga pasyente, ang parasitocenosis ay kinakatawan ng tatlong pathogens, sa 5.2% - ng apat na pathogens. Bukod dito, ang isang kumbinasyon ng chlamydia na may gardnerella at Candida fungi ay madalas na nabanggit. Ang mga datos na ito ay nagpapatunay sa pangangailangan para sa isang masusing pagsusuri sa bacteriological ng mga pasyente na may GH upang makilala ang mga kumbinasyon ng mga pathogenic na ahente, pati na rin ang isang malalim na pag-aaral ng pathogenesis ng halo-halong mga impeksiyon ng urogenital tract, na magbibigay-daan para sa differentiated complex therapy ng herpes infection.

Mga materyales na pinag-aralan para sa paghihiwalay ng HSV depende sa lokalisasyon ng mga herpetic lesyon

Lokalisasyon ng mga sugat	Mga nilalaman ng vesicle	Pag-scrape ng cell				CSF	Bronchial aspirate	Biopsy	Dugo
		1	2	3	4
Balat	+								+
Mga mata			+						+
Mga ari				+					+
Anus	+				+				+
Bibig	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Mga baga		+					+		+
Atay								+	+
Congenital herpes	+	+	+				+		+

Mga pamamaraan ng diagnostic sa laboratoryo ng impeksyon sa cytomegalovirus

Pamamaraan	Oras na kinakailangan upang makakuha ng mga resulta	Mga Tala
VIROLOHIKAL
Electron microscopy	3 oras	Hindi masyadong accessible
Paghihiwalay ng virus sa cell culture (VCI)	4-20 araw	Standard, Mabagal
Immunofluorescence staining ng maagang AG gamit ang monoclonal antibodies	6 na oras	Hindi gaanong tiyak
CYTOLOGICAL	2-3 oras	Hindi gaanong tiyak
SEROLOHIKAL
RSC	2 araw	Pamantayan
RGA	1 araw	Labour intensive
REEF	6 na oras	Simple, tiyak
NRIF	6 na oras	Mahirap
RIMP	6 na oras	Mahirap
ELISA (IgM, DO)	6 na oras	Mabilis, simple
Immunoblot	6 na oras	Mahal
MOLECULAR BIOLOGICAL
MG	5-7 araw	Mahal, labor-intensive
PCR	3 oras	Mahal

Mga pamamaraan ng diagnostic ng herpes zoster virus

Mga pamamaraan ng diagnostic	Mga diskarte sa laboratoryo
DIREKTO
Pagpili	Tissue culture, mga embryo ng manok, mga hayop sa laboratoryo, co-culture na may mga permissive cell o helper virus
Pagkilala sa mga isolates	Reaksyon ng neutralisasyon, RSC, IF, PIEF, reaksyon ng isolates precipitation, agglutination, IF
DIREKTA
Cytology	Mga pahid: immunofluorescence ng kulay
Histology	Pathomorphology ng cell
Istruktura	Embryonic microscopy, immunoelectron microscopy
Pagpapasiya ng antigens	KUNG, PIEF, RIM, IFA
Pagpapasiya ng lokal na produksyon ng antibody	Ig M, Ig G, Ig A: ELISA, RIA
Molecular biological approach	Molecular hybridization, PCR

Mga diagnostic sa laboratoryo ng impeksyon na dulot ng herpes zoster virus

Mga problema sa diagnostic	Pamamaraan	Mga inaasahang resulta
Talamak na pangunahing impeksiyon	1	Detection sa loob ng 2 oras
	2	Ang mga antas ng antibody ay dahan-dahang tumataas
	3	Ipakita 3 araw pagkatapos ng impeksyon
Acute reactivated infection	1	Pag-detect ng UUU pagkatapos ng 2 oras
	2	Ang mga antas ng antibody ay dahan-dahang tumataas
	4	Ipakita 4 na araw pagkatapos lumitaw ang pantal

1. pagpapasiya ng mga vesicle ng VEGF sa likido;
2. serology: CSC, ELISA, na naglalayong tuklasin
3. serology: ELISA na naglalayong makita ang IgM;
4. serology: ELISA na naglalayong makita ang IgA, IgM.

Mga paraan para ipahiwatig ang immune response sa herpes zoster virus infection

Diskarte	Pamamaraan
Ang pagtuklas ng pagtaas ng titer ng antibody sa pangalawang sera	RSK, RTGA, RPGA, IF neutralization reaction, RIM, ELISA
Ang pagtuklas ng Ig G, Ig A na mga antibodies na partikular sa klase sa unang sample ng serum	ELISA, IF, RIM, latex agglutination

Interpretasyon ng mga resulta ng serological na pagsusuri ng sera ng mga pasyente para sa mga impeksyon sa herpesvirus (ELISA)

Pangalan ng impeksyon/marker	Average na mga halaga ng threshold para sa mga impeksyon
	Mga resulta ng pagsusuri	Interpretasyon
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 U/ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positibo 1-6 Positibo 6-10 Positibo >10 Negatibo Positibo 100-300 Negatibo <90 Nagdududa 90-100	Pagpapatawad Paglala ng sakit Talamak na yugto ng sakit Walang impeksyon (sakit) Talamak na yugto ng sakit Ulitin ang pagsusuri sa loob ng 2-3 linggo
Herpes simplex 1,2 serotypes Anti-HSV 1/2 kabuuang (100-900%)	Positibong 100-400 Positibo 400-800 Positibo >800 Negatibo <100	Pagpapatawad Paglala ng sakit Talamak na yugto ng sakit Walang impeksyon (sakit)

Ang talahanayan ay nagpapakita ng mga pangunahing pamamaraan ng mga diagnostic ng laboratoryo ng mga impeksyon sa herpesvirus, pati na rin ang mga inirerekomendang biological na materyales na sinusuri kapag ihiwalay ang HSV, na isinasaalang-alang ang lokalisasyon ng mga herpetic lesyon.

Maaasahang nagbubukod ng herpes simplex at CMV na mga virus sa pamamagitan ng pagkahawa sa mga sensitibong kultura ng cell. Kaya, sa panahon ng pagsusuri sa virological ng 26 na mga pasyente sa panahon ng pagbabalik sa dati, ang HSV ay nakahiwalay sa isang sensitibong kultura ng Vero cell sa 23 na mga kaso (88.4%). Ang mga nahawaang kultura ay nagpakita ng isang larawan ng cytopathic na pagkilos na tipikal para sa HSV - ang pagbuo ng multinucleated giant cells o isang akumulasyon ng mga bilugan at pinalaki na mga cell sa anyo ng mga kumpol. Sa 52.1% ng mga kaso, ang foci ng cytopathic action ng virus ay maaaring matukoy na sa 16-24 na oras pagkatapos ng impeksyon. Sa pamamagitan ng 48-72 oras ng pagpapapisa ng itlog ng mga nahawaang kultura, ang porsyento ng mga materyales na nagdudulot ng tiyak na pagkasira ng mga selula ay tumaas sa 87%. At sa 13% lamang ng mga kaso ay nakita ang mga positibong resulta 96 na oras pagkatapos ng impeksyon o higit pa o sa paulit-ulit na pagpasa.

Mga pamamaraan ng diagnostic sa laboratoryo ng pangkalahatang impeksyon sa herpes

Ang mga pangunahing pamamaraan na naglalayong makita (ihiwalay) ang mga herpes virus, ang kanilang mga particle at ang kanilang mga bahagi	Mga pantulong na pamamaraan na naglalayong tuklasin ang mga antibodies sa mga herpes virus sa mga biological fluid, pag-detect ng mga enzymatic shift sa serum ng dugo
Paghihiwalay ng mga herpes virus sa sensitibong selula at kultura ng hayop Direkta at immune electron microscopy Direkta at hindi direktang variant ng immunoperoxidase method Direkta at hindi direktang variant ng fluorescent antibody method Mga variant ng solid-phase enzyme immunoassay Mga variant ng molecular (DNA-DNA) hybridization method Polymerase chain reaction Latex agglutination reaction	Pagsusuri sa pag-neutralisasyon Complement fixation test Latex agglutination test Hindi direktang bersyon ng fluorescent antibody method Hindi direktang bersyon ng immunoperoxidase method Mga variant ng solid-phase enzyme immunoassay Immune blotting method Radial complement fixation method Pagtukoy ng antas ng alanine at aspartate aminotransferase

Ang mga serological na pamamaraan ay ginagamit upang masuri ang nakakahawang mononucleosis (isang impeksiyon na dulot ng EBV). Ang reaksyon ni Paul-Bunnell na may mga red blood cell ng ram, isang diagnostic titer na 1:28 o mas mataas sa isang pagsusuri sa serum ng dugo, o isang 4 na beses na pagtaas ng mga antibodies kapag sinusuri ang mga nakapares na serum. Ang reaksyon ng Hoff-Bauer na may 4% na pagsususpinde ng pormalinized na mga red blood cell ng kabayo ay ginagamit. Ang resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 2 minuto; sa nakakahawang mononucleosis, ang reaksyon ay lubos na tiyak.

Sa kasalukuyan, isang paraan ng enzyme immunoassay (EIA) para sa pag-diagnose ng nakakahawang mononucleosis. Sa kasong ito, ang IgG at IgM antibodies sa serum ng pasyente ay tinutukoy sa pamamagitan ng pagpapapisa nito ng mga lymphoblast na nahawaan ng EBV, na sinusundan ng paggamot na may mga fluorescent antibodies. Sa talamak na panahon ng sakit, ang mga antibodies sa viral capsid antigen ay tinutukoy sa isang titer na 1:160 at mas mataas.

Kapag gumagamit ng isang bilang ng mga imported na commercial test system, ang ELISA ay maaaring makakita ng: antibodies sa EBV envelope antibodies, antibodies sa EBV maagang antigen, kabuuang antibodies sa EBV maagang antigen, tinutukoy sa talamak na yugto ng sakit sa nucleus at sa cell cytoplasm, at limitadong antibodies sa maagang EBV, na tinutukoy sa acute cycleto EB, limitado sa nucleus sa unang bahagi ng sakit at parehong sa antibodies sa nucleus. antigen, na tinutukoy sa taas ng sakit lamang sa cell cytoplasm, at mga antibodies sa EBV nuclear antigen. Ang paggamit ng mga test system na ito ay nagbibigay-daan para sa differential diagnostics ng isang bilang ng mga sakit na nauugnay sa EBV.

Pagkatapos ng isang positibong pagsusuri sa ELISA na nagpapakita ng mga antibodies sa EBV, ang isang confirmatory immunoblotting reaksyon ay ginanap, na tumutukoy sa pagkakaroon ng mga antibodies sa mga indibidwal na EBV marker proteins (p-proteins): p23, p54, p72 (ang pagkakaroon ng protina na ito ay nagpapahiwatig ng posibilidad ng pagpaparami ng EBV), p 138. Ang mga pamamaraan sa itaas ng laboratoryo ng paggamot ay ginagamit din upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot sa laboratoryo.

Ang sensitivity ng mga pamamaraan ng virological ay 85-100%, ang pagtitiyak ay 100%, ang oras ng pag-aaral ay 2-5 araw. Ang direktang immunofluorescence method (DIF) na may polyclonal o monoclonal antibodies laban sa HSV-1 at HSV-2 ay kadalasang ginagamit sa praktikal na gawain. Ang pamamaraan ng DIF ay medyo madaling kopyahin sa isang regular na klinikal na laboratoryo, ay hindi mahal, ang sensitivity ay higit sa 80%, ang pagtitiyak ay 90-95%. Ang immunofluorescence microscopy ay nagsiwalat ng pagkakaroon ng cytoplasmic inclusions, morphological features, ang porsyento ng mga nahawaang cell sa smears-scrapings mula sa urethra, cervical canal, cervix, rectum.

Ang pamamaraan ng PIF ay nagbibigay ng ideya ng mga morphological na katangian ng mga cell at mga pagbabago sa lokalisasyon ng HSV antigens. Bilang karagdagan sa mga direktang senyales ng pagkasira ng cell ng herpes virus (detection of specific luminescence), may mga hindi direktang senyales ng herpes infection ayon sa data ng PIF:

• pagsasama-sama ng nuclear matter, detatsment ng karyolemma;
• ang pagkakaroon ng tinatawag na "butas" na nuclei, kapag isang karyolemma lamang ang nananatili mula sa cell nucleus;
• ang pagkakaroon ng intranuclear inclusions - Cowdry na katawan.

Kapag nagsasagawa ng PIF, ang doktor ay tumatanggap hindi lamang ng isang husay kundi pati na rin ng isang quantitative na pagtatasa ng estado ng mga nahawaang selula, na ginamit namin upang masuri ang pagiging epektibo ng antiviral therapy na may acyclovir (AC). Kaya, 80 mga pasyente na may simpleng genital herpes (GH) ay napagmasdan gamit ang PIF method sa dynamics. Ipinakita na kung bago ang paggamot na may acyclovir, 88% ng mga pasyente ay may mataas na porsyento ng mga nahawaang selula (50-75% at mas mataas) sa mga smear, pagkatapos pagkatapos ng isang kurso ng acyclovir, ang mga malulusog na selula ay nakita sa mga pahid ng 44% ng mga pasyente, sa 31% ng mga kaso, ang mga solong nahawaang selula ay nabanggit, at sa 25% ng mga pasyente ay may mga nahawaang selula.

Nilalaman ng mga nahawaang selula sa mga pahid (PIF reaction) ng mga pasyenteng may genital herpes na ginagamot ng acyclovir

Mga panahon ng sakit	Porsiyento ng nilalaman sa mga smears
	Mga nahawaang selula					Mga normal na selula
	Higit sa 75%	50-75%	40-50%	10%	Mga solong cell sa larangan ng view
Pagbabalik sa dati (bago ang paggamot)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Pagpapatawad (pagkatapos ng paggamot)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Gamit ang PIF at ang dot hybridization method sa loob ng maraming taon, nabanggit na ang mga resulta ng pag-aaral ay nag-tutugma sa halos 100% ng mga kaso. Dapat pansinin na upang madagdagan ang pagiging maaasahan ng diagnosis ng herpes, lalo na sa mga kaso ng subclinical at low-manifest forms ng herpes, inirerekumenda na gumamit ng 2-3 mga pamamaraan ng diagnostic sa laboratoryo sa trabaho, lalo na kapag sinusuri ang mga buntis na kababaihan, kababaihan na may hindi kanais-nais na kasaysayan ng obstetric, at mga taong may hindi natukoy na gynecological diagnosis.

Kaya, sa mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon sa viral at bacterial ng urogenital tract, kinakailangan upang suriin ang mga positibong resulta na nakuha na isinasaalang-alang ang anamnesis, ang pagkakaroon (o kawalan) ng mga partikular na klinikal na sintomas ng sakit. Kung ang chlamydia ay napansin gamit ang PCR, kung gayon sa kasong ito ay may mataas na posibilidad ng impeksyon at ang mga isyu ng therapy ay maaaring malutas nang naaayon. Sa kaso ng pagtuklas ng mycoplasmas (ureaplasmas), na mga oportunistikong microorganism, ang mga karagdagang pag-aaral sa kultura ay kinakailangan upang kumpirmahin ang diagnosis, ibig sabihin, paghahasik ng materyal mula sa pasyente sa mga sensitibong kultura ng cell. Kung ang mga positibong resulta ay nakuha sa pagsusuri sa kultura maaari nating pag-usapan ang tungkol sa kumpirmasyon ng laboratoryo ng diagnosis ng mycoplasmosis. Ang parehong paraan ay magbibigay-daan, kung kinakailangan, upang matukoy ang sensitivity ng mga nakahiwalay na mycoplasmas sa madalas na ginagamit na mga form ng dosis (antibiotics, fluoroquinolones, atbp.).

Posible ang sabay-sabay na impeksyon sa ilang mga virus ng pamilyang Herpesviridae. Madalas naming natukoy ang impeksyon ng isang pasyente na may HSV-1, HSV-2 at CMV na mga virus. Ang mga pasyente na may clinical at laboratory manifestations ng pangalawang IDS (oncohematological, oncological, HIV-infected na mga pasyente) ay mas madalas na nahawaan ng ilang herpes virus. Kaya, ipinakita na ang mga klinikal at immunological na karamdaman na umuunlad sa impeksyon sa HIV ay sinamahan ng pagtaas ng bilang ng mga herpes virus na nakita ng molecular hybridization method. Sa kasong ito, ang pinaka-prognostically makabuluhang ay maaaring isaalang-alang ang kumplikadong sabay-sabay na pagtuklas ng HSV-1, CMV at HHV-6 na uri ng DNA.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]