Pagsusuri ng polymorphism ng haba ng fragment ng paghihigpit

Ang malawakang paggamit ng iba't ibang restriction endonucleases para sa pagsusuri ng chromosomal DNA ay nagsiwalat ng napakalaking pagkakaiba-iba ng genome ng tao. Kahit na ang mga maliliit na pagbabago sa coding at regulasyon na mga rehiyon ng mga structural genes ay maaaring humantong sa pagtigil ng synthesis ng isang partikular na protina o sa pagkawala ng function nito sa katawan ng tao, na kadalasang nakakaapekto sa phenotype ng pasyente. Gayunpaman, humigit-kumulang 90% ng genome ng tao ay binubuo ng mga non-coding sequence, na mas variable at naglalaman ng maraming tinatawag na neutral mutations, o polymorphism, at walang phenotypic expression. Ang ganitong mga polymorphic na rehiyon (loci) ay ginagamit sa pagsusuri ng mga namamana na sakit bilang mga genetic marker. Ang polymorphic loci ay naroroon sa lahat ng chromosome at naka-link sa isang partikular na rehiyon ng gene. Sa pamamagitan ng pagtukoy sa lokalisasyon ng isang polymorphic locus, posibleng maitatag kung aling gene ang nauugnay sa mutation na nagdulot ng sakit sa pasyente.

Upang ihiwalay ang mga rehiyon ng polymorphic DNA, ginagamit ang mga bacterial enzymes - mga paghihigpit, ang produkto kung saan ay mga lugar ng paghihigpit. Ang mga kusang mutasyon na nangyayari sa mga polymorphic na site ay ginagawa silang lumalaban o, sa kabilang banda, sensitibo sa pagkilos ng isang partikular na restrictase.

Ang pagkakaiba-iba ng mutational sa mga site ng paghihigpit ay maaaring makita sa pamamagitan ng pagbabago ng haba ng mga fragment ng paghihigpit ng DNA sa pamamagitan ng paghihiwalay sa mga ito gamit ang electrophoresis at kasunod na hybridization na may mga tiyak na DNA probes. Sa kawalan ng paghihigpit sa isang polymorphic site, isang malaking fragment ang makikita sa electrophoregrams, at sa presensya nito, isang mas maliit na fragment ang makikita. Ang pagkakaroon o kawalan ng isang restriction site sa magkatulad na loci ng homologous chromosome ay nagbibigay-daan para sa medyo maaasahang pag-label ng mutant at normal na gene at pagsubaybay sa paghahatid nito sa mga supling. Kaya, kapag pinag-aaralan ang DNA ng mga pasyente sa parehong chromosome kung saan ang isang lugar ng paghihigpit ay naroroon sa isang polymorphic na rehiyon, ang mga maikling fragment ng DNA ay makikita sa electrophoregram. Sa mga pasyente na homozygous para sa isang mutation na nagbabago sa polymorphic restriction site, mas mahahabang fragment ang makikita, at sa heterozygous na mga pasyente, maikli at mahabang fragment.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]