Karyotyping

Para sa pag-aaral ng mga chromosome, ang mga panandaliang kultura ng dugo ay kadalasang ginagamit, pati na rin ang mga selulang buto ng utak at mga kulturang fibroblast. Ang dugo na naihatid sa laboratoryo na may anticoagulant ay napapailalim sa centrifugation para sa pag-ulan ng mga pulang selula ng dugo, at ang mga leukocyte ay incubated sa medium ng kultura para sa 2-3 araw. Ang Phytohemagglutinin ay idinagdag sa sample ng dugo, habang pinabilis nito ang aglutinasyon ng erythrocytes at pinasisigla ang dibisyon ng mga lymphocytes. Ang pinaka-angkop na bahagi para sa pag-aaral ng mga chromosome ay ang metaphase ng mitosis, kaya ang colchicine ay ginagamit upang pigilan ang dibisyon ng mga lymphocytes sa yugtong ito. Ang pagdaragdag ng gamot na ito sa kulturang humahantong sa isang pagtaas sa proporsiyon ng mga selula na nasa metaphase, iyon ay, sa yugto ng cycle ng cell, kapag ang mga chromosome ay pinakamahusay na nakikita. Ang bawat kromosoma ay nagsisilipat (gumagawa ng sarili nitong kopya) at pagkatapos ng naaangkop na kulay ay makikita sa anyo ng dalawang chromatids na naka-attach sa centromere o central constriction. Pagkatapos ay ginagamot ang mga cell na may isang hypotonic solution na sosa klorido, naayos at marumi.

Para sa pagtitina chromosomes, ang Romanovsky-Giemsa tinain, 2% acetaminomine o 2% acetazarine ay mas madalas na ginagamit. Namin ang mga kromosoma nang buo, pantay-pantay (ang karaniwang paraan) at maaaring magamit upang makilala ang mga numerong anomalya ng mga chromosome ng tao.

Upang makuha ang isang detalyadong larawan ng istruktura ng mga chromosomes, pagkakakilanlan (pagkakakilanlan) ng indibidwal na mga chromosome o ng kanilang mga segment, ang iba't ibang mga pamamaraan ng kaugalian na pag-dye ay ginagamit. Ang pinaka-karaniwang ginagamit na mga pamamaraan ay Giemsa, pati na rin ang G- at Q-baluktot. Ang isang mikroskopikong pagsusuri ng gamot kasama ang haba ng kromosoma ay nagpapakita ng isang serye ng mga stained (heterochromatin) at unpainted (euchromatin) na mga banda. Ang katangian ng transverse striation na nakuha sa kasong ito ay nagbibigay-daan upang makilala ang bawat kromosoma sa set, dahil ang mga guhit na alternation at ang kanilang mga laki ay mahigpit na indibidwal at pare-pareho para sa bawat pares.

Ang mga plates ng metaphase ng mga indibidwal na cell ay nakuhanan ng litrato. Ang mga indibidwal na chromosome ay pinutol mula sa mga litrato at inilagay sa sheet ng papel sa pagkakasunud-sunod; Ang isang larawan ng mga chromosome ay tinatawag na karyotype.

Ang paggamit ng mga karagdagang paglamlam, pati na rin ang mga bagong pamamaraan para sa pagkuha ng mga paghahanda ng kromosoma, na nagpapahintulot sa paglawak ng mga chromosome sa haba, makabuluhang taasan ang katumpakan ng mga diagnostic na cytogenetic.

Ang isang espesyal na katawagan ay binuo upang ilarawan ang karyotype ng tao. Ang normal na karyotype ng isang lalaki at isang babae ay itinalaga bilang 46, XY at 46, XX, ayon sa pagkakabanggit. Sa Down's syndrome, nailalarawan sa pagkakaroon ng karagdagang chromosome 21 (trisomy 21), ang karyotype ng kababaihan ay inilarawan bilang 47, XX 21+, at lalaki - 47, XY, 21+. Sa pagkakaroon ng isang estruktural anomalya ng kromosoma, kinakailangan upang ipahiwatig ang isang binago na mahaba o maikling braso: ang titik p ay nagpapahiwatig ng isang maikling braso, q isang mahabang braso, at isang translocation. Kaya, kapag ang maikling braso ng chromosome 5 (ang "cat-scream" syndrome) ay tinanggal, ang babae na karyotype ay inilarawan bilang 46, XX, 5p-. Ang ina ng isang bata na may translocation Down syndrome - isang carrier ng isang balanseng translocation ng 14/21 ay may karyotype ng 45, XX, t (14q; 21q). Ang kromosoma ng translocation ay nabuo kapag ang mahabang armas ng kromosomang 14 at 21 ay nagsasama, ang mga maikling balikat ay nawala.

Ang bawat balikat ay nahahati sa mga distrito, at sila naman - sa mga segment, at ang mga ito at ang iba pa ay itinalaga ng mga numerong Arabiko. Ang centromere ng kromosoma ay ang panimulang punto para sa pagbilang ng mga rehiyon at mga segment.

Sa gayon, ang apat na marker ay ginagamit para sa topographiya ng mga chromosome: numero ng kromosoma, simbolo ng balikat, numero ng lugar at numero ng segment sa loob ng ibinigay na rehiyon. Halimbawa, 6p21.3 record ay nangangahulugan na kami ay pakikipag-usap tungkol sa ika-6 na chromosome pares, ang maikling braso, area 21, segment 3. Mayroong higit pang mga opsyonal na mga character, sa partikular pter - ang katapusan ng maikling braso, qter - sa dulo ng mahabang braso.

Ang cytogenetic method ng pananaliksik ay nagbibigay-daan upang makita ang mga pagtanggal at iba pang mga pagbabago sa mga chromosome lamang sa laki ng humigit-kumulang 1 milyong base (nucleotide).

[1], [2], [3], [4]