Pagtatasa ng haba ng pagkakahiwalay ng polymorphism

Ang malawak na paggamit ng iba't ibang mga endonucleases sa paghihigpit para sa pag-aaral ng chromosomal DNA ay nagpahayag ng malaking pagkakaiba-iba sa genome ng tao. Kahit na maliit na pagbabago sa coding at regulasyon na mga rehiyon ng estruktural gene ay maaaring humantong sa pagwawakas ng pagbubuo ng isang tiyak na protina o sa pagkawala ng pag-andar nito sa katawan ng tao, na karaniwang nakakaapekto sa phenotype ng pasyente. Gayunpaman, ang humigit-kumulang 90% ng genome ng tao ay binubuo ng di-coding sequence na mas variable at naglalaman ng maraming mga tinatawag na neutral mutations, o polymorphisms, at walang phenotypic expression. Ang ganitong mga polymorphic site (loci) ay ginagamit sa diagnosis ng namamana sakit bilang genetic marker. Ang polymorphic loci ay nasa lahat ng chromosomes at nakaugnay sa isang partikular na rehiyon ng gene. Ang pagkakaroon ng tinukoy na lokalisasyon ng polymorphic locus, posibleng magtatag ng kung aling genome ang isang mutasyon ay nauugnay na sanhi ng sakit sa pasyente.

Upang ihiwalay ang mga polymorphic na rehiyon ng DNA, ginagamit ang bacterial enzymes - mga enzymes sa paghihigpit, ang produkto na kung saan ay mga site ng paghihigpit. Ang mga mabubuting mutasyon na nagaganap sa mga site na polymorphic ay lumalaban sa kanila o, sa kabaligtaran, sensitibo sa pagkilos ng isang partikular na enzyme sa paghihigpit.

Ang pagkakaiba-iba sa mutational sa mga site ng paghihigpit ay maaaring napansin sa pamamagitan ng pagpapalit ng haba ng pinaghihigpitan na mga fragment ng DNA, sa pamamagitan ng paghihiwalay sa kanila gamit ang electrophoresis at kasunod na paghahalo sa mga tukoy na DNA probes. Sa kawalan ng paghihigpit sa isang polymorphic site, isang malaking pira-piraso ang mapapansin sa mga electrophoregrams, at kung kasalukuyan, ang isang mas maliit na piraso ay naroroon. Ang pagkakaroon o kawalan ng isang lugar ng paghihigpit sa magkatulad na loko ng mga homologous chromosome ay posible na mapagkakatiwalaang lagyan ng label ang mutant at normal na gene at sinundan ang pagpapadala nito sa mga supling. Sa gayon, sa pag-aaral ng DNA ng mga pasyente, sa parehong mga chromosome kung saan ang isang lugar ng paghihigpit ay nasa rehiyon na polymorphic, ang mga maikling fragment ng DNA ay ihayag sa electrophoregram. Sa mga pasyente na homozygous para sa isang mutasyon na nagpapabago sa isang site na pagbabawas ng polymorphic, ang mga fragment ng mas malaking haba ay mapapansin, at sa mga heterozygous fragment, maikli at mahabang mga fragment ang makikilala.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]