Pagsusuri ng herpes

Diagnosis ng herpes ay batay sa pag-uugali ng mga klasikong viral pagpapadanak sa sensitibong kultura ng cell, immunofluorescence at serological pamamaraan, isakatuparan colposcopic mga pag-aaral gamit modernong molecular-biological pamamaraan (PCR, dot-paghahalo ng lahi), na nagpapahintulot sa iyo upang i-diagnose ang lahat ng mga herpesvirus group, kabilang ang HHV-6 at HHV-7 mga uri.

Mga pamamaraan ng diagnosis ng laboratoryo ng herpetic infection

Ang mga pangunahing pamamaraan na naglalayong secreting HSV o tiktik ang mga particle ng viral at / o ang kanilang mga bahagi	Ang mga pamamaraan ng pandiwang pantulong na naglalayong tuklasin ang mga antibodies sa HSV sa mga biological fluid ng katawan ng tao
Paghihiwalay ng HSV sa mga sensitibong kultura ng mga selula at hayop Direktang at Immune Electron Microscopy Mga direktang at hindi tuwirang mga pagpipilian sa MFA IFA Molecular biological methods Latex agglutination reaction	Reaksiyong neutralisasyon RSK Ang pagpapasiya ng mga antibodies sa mga non-structural na protina ng HSV-1,2

Ipinakikita na 76% ng mga pasyente ay may genital herpes (GH) na dulot ng HSV-2, at sa 24% - HSV-1 na uri. At GG bilang isang monoinfection ay naganap lamang sa 22% ng mga pasyente, sa 78% ng mga kaso, ang mga microbial association ay napansin. Sa 46% ng mga pasyente, ang parasitocenosis na dulot ng dalawang pathogens ay napansin, kabilang ang chlamydia ay nakita sa 40% ng mga kaso. Mas madalas sa mga smears tinutukoy gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Sa 27% ng mga pasyente, ang parasitocenosis ay kinakatawan ng tatlo, at 5.2% ng apat na pathogens. At mas madalas na may isang kumbinasyon ng chlamydia sa Gardnerella at Candida fungi. Ang mga data na bigyang-katwiran ang pangangailangan para sa isang masusing bakteryolohiko pagsusuri ng mga pasyente YY upang makilala ang mga pathogenic kumbinasyon agent, pati na rin ang in-depth pag-aaral ng pathogenesis ng halo-halong impeksiyon ng urogenital lagay, na kung saan ay magpapahintulot sa para sa isang differentiated complex therapy ng HSV impeksiyon.

Ang mga materyales na pinag-aralan sa paghihiwalay ng HSV depende sa localization ng herpetic lesions

Lokalisasyon ng mga sugat	Mga nilalaman ng mga vesicle	Cell scraping				SDC	Aspirate mula sa bronchi	Bioptat	Dugo
		1	2	3	4
Katad	+								+
Mga mata			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Bibig	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Magaan		+					+		+
Ang atay								+	+
Congenital Herpes	+	+	+				+		+

Mga pamamaraan ng diagnosis ng laboratoryo ng cytomegalovirus infection

Paraan	Oras na kinakailangan upang makakuha ng mga resulta	Mga Tala
VIRUSOLOGICAL
Electron microscopy	3 oras	Pagsabog
Ang paghihiwalay ng virus sa cell culture (CPD)	4-20 araw	Standard, Slow
Immunofluorescent staining ng maagang AH na may monoclonal antibodies	6 na oras	Mas tiyak
CYTOLOGICAL	2-3 oras	Mas tiyak
SEOLOGICAL
RSK	2 araw	Standart
Ssubsistence	1 araw	Laborious
REEF	6 na oras	Simple, tiyak
NFIF	6 na oras	Kumplikado
RIMF	6 na oras	Kumplikado
IFA (IgM, TO)	6 na oras	Mabilis, simple
Immunoblot	6 na oras	Mahal
MOLECULAR-BIOLOGICAL
MG	5-7 araw	Magastos, matagal-tagal
PCR	3 oras	Mahal

Paraan para sa pag-diagnose ng herpes zoster virus

Mga Paraan ng Diagnostic	Mga diskarte sa laboratoryo
HINDI DIREKTA
Paglalaan	Kultura ng tela, mga embryo ng manok, mga hayop sa laboratoryo, paglilinang sa mga permissive cell o helper virus
Pagkakakilanlan ng mga isolates	Reaksyon ng neutralisasyon, DSC, KUNG, IPPE, reaksyon ng mga namuo na nakahiwalay, aglutinasyon, KUNG
DIRECT
Cytology	Smears: kulay immunofluorescence
Histology	Pathomorphology ng cell
Istraktura	Embryonic microscopy, immunoelectronic microscopy
Pagpapasiya ng mga antigen	KUNG, PIÉF, RIM, IFA
Pagpapasiya ng lokal na produksyon ng mga antibodies	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molecular Biological Approaches	Molecular hybridization, PCR

Laboratory diagnosis ng impeksyon na dulot ng herpes zoster virus

Mga problema sa diagnostic	Paraan	Mga inaasahang Resulta
Malalang pangunahing impeksiyon	1	Detection pagkatapos ng 2 oras
	2	Ang antas ng antibodies ay lumalaki nang dahan-dahan
	3	Kasalukuyan 3 araw pagkatapos ng impeksiyon
Talamak na muling nai- impeksiyon	1	Deteksiyon ng ULV sa loob ng 2 oras
	2	Ang antas ng antibodies ay lumalaki nang dahan-dahan
	4	Kasalukuyan 4 araw pagkatapos ng hitsura ng mga rashes

1. ang pagpapasiya sa likido ng mga vesicle ng WIEF;
2. serology: DSC, ELISA, na naglalayong makilala
3. serology: ELISA, na naglalayong tuklasin ang IgM;
4. serology: ELISA, na naglalayong tuklasin ang IgA, IgM.

Paraan para sa pagpapakita ng immune response ng isang impeksyon dahil sa herpes zoster virus

Diskarte	Paraan
Pagtuklas ng nadagdagan na titer ng antibody sa ikalawang sera	RSK, RTGA, RPGA, neutralisasyon reaksyon KUNG, RIM, ELISA
Pagtuklas ng Ig G, Ig Ang isang partikular na antibody sa klase sa unang sample ng suwero	IFA, KUNG, RIM, latex-aglutinasyon

Interpretasyon ng mga resulta ng serological na pagsusuri ng pasyente sera sa herpesvirus impeksyon (ELISA)

Pangalan ng impeksyon / marker	Mga average na limitasyon para sa mga impeksiyon
	Mga resulta ng pagsusuri	Interpretasyon
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positibong 1-6 Positibong 6-10 Positibong> 10 Negatibong Positibong 100-300 Negatibong <90 Nakikiramay 90-100	Pagpapala Pagpapalubha ng sakit Talamak na bahagi ng sakit Walang impeksiyon (sakit) Talamak na bahagi ng sakit Ulitin ang pagtatasa pagkatapos ng 2-3 na linggo
Herpes simple 1,2 serotypes Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positibong 100-400 Positibong 400-800 Positibong> 800 Negatibong <100	Pagpapala Pagpapalala ng sakit Malalim na bahagi ng sakit Walang impeksiyon (sakit)

Ang talahanayan ay nagtatanghal ng mga pangunahing pamamaraan ng mga diagnostic ng laboratoryo ng mga impeksyong herpesvirus, at inirerekomenda rin ang mga biological na materyales na pinag-aralan sa paghihiwalay ng HSV, isinasaalang-alang ang lokalisasyon ng herpetic lesions

Mapagkakatiwalaan ay ang paglalaan ng herpes simplex at CMV sa pamamagitan ng impeksiyon ng sensitibong kultura ng cell. Kaya, sa pagsusuri ng virological ng 26 na pasyente sa panahon ng pagbabalik sa dati, ang HSV ay nakahiwalay sa isang sensitibong kulturang Vero cell sa 23 kaso (88.4%). Sa mga nahawaang kultura, ang isang pattern ng pagkilos ng cytopathic na katangian ng HSV ay napagmasdan-ang pagbuo ng multinucleated giant cells o ang akumulasyon ng bilugan at pinalaki na mga cell sa anyo ng mga bungkos. Sa 52.1% ng mga kaso, posibleng makita ang foci ng cytopathic effect ng virus sa pamamagitan ng 16-24 oras pagkatapos ng impeksiyon. Sa pamamagitan ng 48-72 oras ng pagpapapisa ng itlog ng mga nahawaang kultura, ang porsyento ng mga materyal na nagdulot ng tiyak na pagkasira ng cell ay nadagdagan sa 87%. At lamang sa 13% ng mga kaso, positibong resulta ay nakita 96 oras pagkatapos ng impeksyon at higit pa o may paulit-ulit na pagpasa.

Mga pamamaraan ng diagnosis ng laboratoryo ng pangkalahatan na impeksyon sa herpetiko

Ang mga pangunahing pamamaraan na nakatuon sa pagtuklas (paghihiwalay) ng herpesviruses, ang kanilang mga particle at ang kanilang mga bahagi	Ang mga pamamaraan ng pandiwang pantulong na naglalayong tuklasin ang mga antibodies sa mga virus ng herpes sa mga biological fluid, ang pagtuklas ng enzymatic shifts sa serum ng dugo
Paghihiwalay ng Herpes virus sa madaling kapitan cell kultura at hayop Direct at immune elektron mikroskopya Direktang at tuwiran immunoperoxidase paraan embodiments Direktang at tuwiran fluorescent antibody pamamaraan na pagpipilian pagpipilian ELISA embodiments ng molecular (DNA-DNA) hybridizing Polymerase Chain Reaction Reaction LaTeX aglutinasyon	Ang neutralisasyon reaksyon pampuno pagkapirmi reaksyon LaTeX aglutinasyon Hindi direktang fluorescent antibody pamamaraan sagisag Hindi direktang immunoperoxidase paraan variant embodiments ELISA Pamamaraan ng immune blotting radial pagkapirmi ng pandagdag Pamamaraan Pagpapasiya ng alanine at aspartate antas

Upang masuri ang mga nakakahawang mononucleosis (impeksiyon na dulot ng VEB), ginagamit ang mga pamamaraan ng serological. Reaksyon Paul-Bunnelya na may tupa erythrocytes, ang titer ng 1:28, Diagnostic at sa itaas para sa isang solong pag-aaral suwero, o 4-fold antibody pagtaas kapag sinusuri ang nakapares sera. Gamitin ang reaksiyong Goff-Bauer na may suspensyon ng 4% pormal na red blood cells ng kabayo. Ang resulta ay kinuha sa account pagkatapos ng 2 minuto, na may nakakahawang mononucleosis ang reaksyon ay lubos na tiyak.

Sa kasalukuyan, ang isang enzyme immunoassay (ELISA) ay binuo upang masuri ang nakakahawang mononucleosis. Sa kasong ito, ang IgG at IgM antibodies sa serum ng pasyente ay natutukoy sa pamamagitan ng paglubog sa mga ito sa mga lymphoblast na nahawaan ng EBV, na sinusundan ng paggamot na may mga fluorescent antibodies. Sa matinding panahon ng sakit, ang mga antibodies sa viral capsid antigen ay tinutukoy sa isang titer ng 1: 160 at sa itaas.

Kapag gumagamit ng isang bilang ng mga imported na komersyal na sistema ng pagsubok sa ang IFA ay maaaring makilala: antibodies sa ant Egan EBV envelope antibodies sa unang bahagi ng antigen ng EBV, ang pangkalahatang antibody sa isang maagang antigen ng EBV, natukoy sa talamak na yugto ng sakit at sa mga nucleus at sa cytoplasma, at ang limitadong antibody EBV maaga, natutukoy sa talamak na yugto ng sakit at sa mga nucleus at sa saytoplasm ng cell, bounded antibodies sa EBV unang bahagi antigen, natukoy sa gitna ng sakit lamang sa saytoplasm ng cell, at antibodies sa EBV nuclear antigen. Ang paggamit ng mga sistema ng pagsubok ay nagbibigay-daan sa pagkakaiba-iba ng diagnosis ng isang bilang ng mga sakit na nauugnay sa EBV.

Pagkatapos positibong ELISA upang makilala ang mga antibodies EBV bigyan immunoblot nagkukumpirma na tugon, na kung saan tiktikan ang pagkakaroon ng antibodies upang paghiwalayin EBV marker protina (p-protina): P23, P54, p72 (ang presensya ng protina ay nagmumungkahi ang posibilidad ng paggawa ng maraming kopya EBV), p 138. Said sa itaas ng mga pamamaraan ng laboratoryo ay ginagamit upang kontrolin ang pagiging epektibo ng paggamot.

Ang pagiging sensitibo ng mga pamamaraan ng virological ay 85-100%, ang pagtitiyak ay 100%, ang oras ng pag-aaral ay 2-5 na araw. Kadalasan sa pagsasanay, ang paraan ng direct immunofluorescence (PIF) na may polyclonal o monoclonal antibodies laban sa HSV-1 at HSV-2 ay ginagamit. Ang pamamaraan ng UIF ay maaaring madaling kopyahin sa isang maginoo klinikal na laboratoryo, ito ay hindi magastos, ang sensitivity ay higit sa 80%, ang pagtitiyak ay 90-95%. Sa pamamagitan ng immunofluorescent mikroskopya nagsiwalat ng pagkakaroon ng cytoplasmic inclusions, morphological katangian, ang porsyento ng mga nahawaang cells sa smears, scrapes urethral, servikal kanal, serviks, tumbong.

Ang pamamaraan ng UIF ay nagbibigay ng ideya ng mga katangian ng morphological ng mga selula at mga pagbabago sa lokalisasyon ng mga antigens ng HSV. Bilang karagdagan sa mga direktang palatandaan ng pinsala ng cell ng mga virus ng herpes (pagtuklas ng tiyak na luminescence), mayroong mga hindi direktang palatandaan ng herpetic infection ayon sa data ng UIF:

• pagsasama-sama ng nukleyar na bagay, pag-exfoliate ng karyoolma;
• pagkakaroon ng tinatawag na. Nuclei "butas", kapag ang isang karyolemma lamang ang nananatiling mula sa nucleus ng cell;
• ang pagkakaroon ng intranuclear inclusions - Caudry's calf.

Kapag nagse-set ang UIF doktor na natatanggap ng hindi lamang kalidad, ngunit din ng isang nabibilang na pagtatasa ng mga nahawaang cells na kami ay ginagamit upang suriin ang pagkaepektibo ng antiviral therapy na may acyclovir (AC). Sa gayon, 80 mga pasyente na may mga simpleng genital herpes (GG) ang sinuri ng pamamaraan ng UIF sa mga dinamika. Ito ay ipinapakita na kung, bago ang paggamot na may acyclovir sa smears 88% ng mga pasyente ay nagkaroon ng isang mataas na porsyento ng mga nahawaang cells (50-75% at sa itaas), pagkatapos ng isang kurso ng acyclovir sa smears 44% ng mga pasyente na may malusog na mga selula napansin sa 31% ng mga kaso ay minarkahan indibidwal nahawaang cell at 25% ng mga pasyente ay may hanggang sa 10% ng mga nahawaang mga selula.

Ang nilalaman ng mga nahawaang selula sa smears (reaksyon ng PIF) ng mga pasyente na may genital herpes, na ginagamot sa acyclovir

Mga Panahon ng Sakit	Porsyento sa smears
	Mga nahawaang cell					Normal na mga cell
	Higit sa 75%	50-75%	40-50%	10%	Single cell sa n / sp
Bumalik (bago ang paggamot)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Pagpapahintulot (pagkatapos ng paggamot)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Gamit ang maraming mga taon ng UIF at ang paraan ng dot-hybridization, halos 100% ng mga kaso ay tumutugma sa mga resulta ng pag-aaral. Dapat ito ay nabanggit na upang taasan ang pagiging maaasahan ng diyagnosis ng GH, lalo na sa mga kaso kung saan may subclinical at malomanifestnyh paraan ng herpes, ito ay inirerekumenda na gumamit ng 2-3 paraan ng laboratoryo diyagnosis, lalo na kapag sinusuri ang mga buntis na kababaihan, mga kababaihan na may karunungan sa pagpapaanak kasaysayan disadvantaged, mga taong may mga hindi natukoy na mga ginekologiko pagsusuri.

Kaya, kapag ang diagnosis ng PCR ng mga impeksyon sa viral-bacterial ng urogenital tract, kinakailangan upang suriin ang mga positibong resulta na nakuha na isinasaalang-alang ang anamnesis, ang presensya (o pagkawala) ng mga tiyak na clinical sintomas ng sakit. Kung ang chlamydia ay napansin sa PCR, pagkatapos ay sa kasong ito posibleng makipag-usap tungkol sa impeksiyon at malutas ang mga problema ng therapy nang naaayon. Sa kaso ng pagtuklas ng mycoplasmas (ureaplasmas), na mga oportunistang mikroorganismo, ang mga karagdagang pag-aaral ng kultura ay kinakailangan upang kumpirmahin ang diagnosis, iyon ay, ang paghahasik ng materyal mula sa pasyente hanggang sa sensitibong kultura ng cell. Tanging kapag ang mga positibong resulta ay nakuha sa pag-aaral ng kultura maaari naming magsalita tungkol sa laboratoryo kumpirmasyon ng diagnosis ng mycoplasmosis. Ang parehong pamamaraan ay magpapahintulot, kung kinakailangan, upang matukoy ang pagiging sensitibo ng nakahiwalay na mycoplasmas sa mga madalas na ginagamit na panggamot na mga porma (antibiotics, fluoroquinolones, atbp.).

Marahil ang isang isang yugto ng impeksyon na may ilang mga virus ng pamilya Nepresviridae. Kadalasan nakita namin ang impeksyon ng isang pasyente na may mga HSV-1, HSV-2 at CMV na mga virus. Ang mas madalas na impeksyon sa ilang mga virus ng herpes ay mga pasyente na may manifestations ng klinikal at laboratoryo ng mga pangalawang IDS (mga pasyente na may oncohematological, oncolohiko, nahawaan ng HIV). Sa gayon, ipinakita na ang mga klinikal at immunological disorder na umuunlad sa impeksyon sa HIV ay sinamahan ng isang pagtaas sa bilang ng mga herpesviruses na nakita ng paraan ng molecular hybridization. Sa prognostically pinaka-makabuluhang ito ay maaaring isaalang-alang ang isang kumplikadong isang yugto detection ng DNA ng HSV-1, CMV at HHV-6 uri.

[1], [2], [3]