Immunologic na pag-aaral sa urology

Ang pagrereseta ng immunogram sa isang urological na pasyente ay nangangahulugan na ang dumadating na manggagamot ay pinaghihinalaan ang pagkakaroon ng mga karamdaman sa immune system. Ang paulit-ulit na bacterial, viral, fungal infection, allergic manifestations, systemic disease ay maaaring mga palatandaan ng mga karamdamang ito, na kung saan ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang bilang ng mga sindrom (nakakahawang, oncological, allergic, autoimmune, lymphoproliferative). Ang isang pasyente ay maaaring magkaroon ng ilang mga sindrom. Halimbawa, ang mga talamak na nakakahawang sakit (infectious syndrome) ay maaaring maging sanhi ng immunodeficiency, at ang immunodeficiency ay maaaring magpakita ng sarili bilang isang predisposisyon sa mga nakakahawang at oncological na sakit (oncological syndrome). Ang predisposisyon sa mga impeksyon ay maaaring mangyari laban sa background ng pangalawang immunodeficiency, na nabuo bilang isang resulta ng isang lymphoproliferative na sakit, tulad ng leukemia. Mayroong tatlong pangunahing grupo ng mga pathological na pagbabago sa immune system:

• quantitative o functional deficiency ng isa o ibang link ng immune system, na humahantong sa pagbuo ng isang immunodeficiency state;
• isang karamdaman sa pagkilala ng mga antigen ng immune system, na humahantong sa pag-unlad ng mga proseso ng autoimmune;
• isang hyperreactive o "perverted" immune response, na ipinakita sa pamamagitan ng pag-unlad ng mga allergic na sakit.

Mayroong screening (level 1 tests) at clarifying (level 2 tests) na paraan ng immunodiagnostics. Ang una ay umiiral upang magtala ng mga kaguluhan sa immune system, ang huli - upang maitatag ang mga mekanismong kasangkot sa kanilang pagpapatupad para sa layunin ng karagdagang immunocorrection.

B-cell na kaligtasan sa sakit

Mga pamamaraan ng screening

• Pagpapasiya ng kamag-anak at ganap na bilang ng B-lymphocytes gamit ang immunofluorescence o daloy ng cytofluorometry na may monoclonal antibodies sa B-cell antigens (CD19, CD20, kung saan ang CD ay mga kumpol ng pagkita ng kaibahan). Ang normal na nilalaman ng B-lymphocytes sa mga matatanda ay 8-19% ng kabuuang bilang ng mga leukocytes o 190-380 cells/μl. Ang pagtaas sa nilalaman ng B-lymphocytes ay nangyayari sa talamak at talamak na bacterial at fungal na impeksyon, talamak na sakit sa atay, systemic connective tissue disease, talamak na lymphocytic leukemia, at myeloma.
• Pagpapasiya ng konsentrasyon ng mga di-tiyak na immunoglobulin (F, M, G, E) sa pamamagitan ng simpleng radial immunodiffusion, nephelometry o turbometry, radioimmunoassay o enzyme immunoassay (ELISA). Mga pamantayan para sa mga matatanda: immunoglobulin (Ig) A 0.9-4.5 g / l. IgM 03-3.7 g / l. IgG 8.0-17 g / l. Ang isang pagtaas sa konsentrasyon ng mga immunoglobulin ay nangyayari sa parehong mga kondisyon ng pathological kung saan ang pagtaas sa nilalaman ng B-lymphocytes ay nangyayari. Ang pagbaba sa konsentrasyon ng immunoglobulins ay nangyayari sa congenital hypogammaglobulinemia, neoplasms ng immune system, pag-alis ng pali, pagkawala ng protina, sakit sa bato o bituka, paggamot na may cytostatics at immunosuppressants.

Mga pamamaraan ng paglilinaw

• Ang pagpapasiya ng mga nagpapalipat-lipat na immune complex sa dugo sa pamamagitan ng selective precipitation sa polyethylene glycol na sinusundan ng spectrophotometric density testing (normal 80-20 U). Ang pagtaas sa nagpapalipat-lipat na mga immune complex ay tipikal para sa talamak na bacterial, fungal, viral infection, autoimmune, immune complex na sakit, serum sickness, allergic reactions ng type 3;
• Pagpapasiya ng mga tiyak na immunoglobulin sa dugo na may kaugnayan sa bacterial at viral antigens, deoxyribonucleic acid (DNA) sa mga sakit na autoimmune, pagtuklas ng antisperm (autoimmune infertility) at antirenal antibodies (pyelonephritis at glomerulonephritis) sa pamamagitan ng radial immunodiffusion o ELISA method.
• Pagpapasiya ng antisperm antibodies sa sperm [MAR test (mixed antiglobulin reaction)], normal - negatibong resulta.
• Pagpapasiya ng konsentrasyon ng mga immunoglobulin sa ihi para sa layunin ng differential diagnosis sa pagitan ng pyelonephritis at glomerulonephritis (selectivity ng proteinuria).
• Pagpapasiya ng nilalaman ng IgE sa prostate juice para sa layunin ng pag-diagnose ng allergic prostatitis gamit ang radial immunodiffusion method o ELISA.
• Pag-aaral ng tugon sa reaksyon ng B-lymphocyte blast transformation sa B-cell mitogen (pokeweed mitogen para sa pagpapasigla ng reaksyon ng B-lymphocyte blast transformation sa pagkakaroon ng T-lymphocytes), ang normative value na 95-100%.

T-cell na link ng kaligtasan sa sakit

Mga pamamaraan ng screening

• Pagpapasiya ng kamag-anak at ganap na bilang ng mature CD3 T-lymphocytes sa pamamagitan ng immunofluorescence reaksyon o daloy ng cytofluorometry gamit ang monoclonal anti-CD3 antibodies. Ang pamantayan para sa mga matatanda ay 58-76% o 1100-1700 na mga cell / μl. Ang pagbawas sa bilang ng mga T-lymphocytes ay isang tagapagpahiwatig ng kakulangan ng cellular link ng kaligtasan sa sakit. Ito ay tipikal para sa ilang pangalawang at pangunahing immunodeficiencies (talamak na bacterial at viral infection: tuberculosis, acquired immunodeficiency syndrome, malignant tumor, talamak na pagkabigo sa bato, pinsala, stress, pagtanda, malnutrisyon, paggamot na may cytostatics, pagkakalantad sa ionizing radiation). Ang isang pagtaas sa bilang ng mga T-lymphocytes ay nangyayari laban sa background ng immune hyperactivity o sa mga sakit na lymphoproliferative. Sa pamamaga, ang bilang ng T-lymphocytes ay unang tumataas at pagkatapos ay bumababa. Ang kawalan ng pagbaba sa T-lymphocytes ay nagpapahiwatig ng isang talamak na proseso ng pamamaga.
• Pagsusuri ng mga subpopulasyon ng lymphocyte.
  • Pagpapasiya ng bilang ng mga T-helper (anti-CD4 antibodies). Karaniwan 36-55% o 400-1100 cells/mcl. Ang pagtaas sa bilang ng mga selulang ito ay nangyayari sa mga sakit na autoimmune, sakit na Waldenstrom, pag-activate ng kaligtasan sa antitransplant; ang pagbaba sa bilang ng mga T-helpers ay nangyayari sa talamak na bacterial, viral, protozoan infections, tuberculosis, acquired immunodeficiency syndrome, malignant na mga tumor, pagkasunog, pinsala, malnutrisyon, pagtanda, paggamot na may cytostatics, pagkakalantad sa ionizing radiation.
  • Pagpapasiya ng bilang ng mga T-suppressor (anti-CD4 antibodies). Karaniwan 17-37% o 300-700 cells/μl. Ang pagtaas sa bilang ng mga T-suppressor ay nangyayari sa parehong mga kondisyon kung saan ang bilang ng mga T-helpers ay bumababa, at ang kanilang pagbaba ay nangyayari sa parehong mga kondisyon kung saan ang nilalaman ng mga T-helpers ay tumataas.
  • Immunoregulatory index CD4/CD8, karaniwang 1.5-2.5. Hyperactivity na may mga halaga na higit sa 2.5 (allergic at autoimmune na mga sakit); hypoactivity - mas mababa sa 1.0 (predisposition sa malalang impeksiyon). Sa simula ng proseso ng nagpapasiklab, ang immunoregulatory index ay tumataas, at kapag ito ay bumaba, ito ay normalizes.

Mga pamamaraan ng paglilinaw

• Pagpapasiya ng bilang ng mga natural killer (NK cells) - anti-CD16 at anti-CD56 antibodies. Ang pamantayan para sa CD 16 lymphocytes ay 6-26%, CD56 - 9-19%. Ang pagtaas sa bilang ng mga selula ng NK ay nangyayari sa panahon ng pagtanggi sa transplant, isang pagbaba - na may mga impeksyon sa viral, kanser, pangunahin at pangalawang immunodeficiencies, pagkasunog, pinsala at stress, paggamot na may cytostatics at pagkakalantad sa ionizing radiation.
• Pagpapasiya ng bilang ng mga T-lymphocytes na may receptor sa interleukin-2 (activation marker) - anti-CD25 antibodies. Ang pamantayan ay 10-15%. Ang isang pagtaas sa kanilang bilang ay sinusunod sa mga allergic na sakit, pagtanggi sa transplant, tugon sa mga antigen na umaasa sa thymus sa talamak na panahon ng pangunahing impeksiyon, isang pagbaba - sa parehong mga sakit kung saan mayroong pagbaba sa bilang ng mga selula ng NK.
• Pag-aaral ng pagpapahayag ng activation marker - class II histocompatibility molekula HLA-DR. Ang pagtaas ng expression ay nangyayari sa mga nagpapaalab na proseso, sa mga pasyente na may hepatitis C, celiac disease, syphilis, acute respiratory disease.
• Pagsusuri ng lymphocyte apoptosis. Ang isang magaspang na ideya ng pagiging handa ng mga lymphocytes para sa apoptosis ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng pagpapahayag ng Fas receptor (CD95) sa kanilang ibabaw at ang bd-2 proto-oncogene sa mitochondria. Ang lymphocyte apoptosis ay tinasa sa pamamagitan ng pagtrato sa kanila ng dalawang fluorescent dyes: propidium iodide, na nagbubuklod sa mga fragment ng DNA, at annexin Y, na nagbubuklod sa phosphatidylserine, na lumilitaw sa cell membrane sa simula ng apoptosis. Ang mga resulta ay sinusuri gamit ang isang flow cytofluorometer. Ang mga resulta ay kinakalkula batay sa ratio ng mga cell na nabahiran ng iba't ibang mga tina. Ang mga hindi nabahiran na mga cell ay mabubuhay, ang mga cell na nakagapos lamang sa annexin Y ay mga maagang pagpapakita ng apoptosis, na may propidium iodide at annexin Y ay mga huling pagpapakita ng apoptosis, ang paglamlam na may lamang propidium iodide ay nagpapahiwatig ng nekrosis.
• Pagsusuri ng T-lymphocyte proliferation sa vitro.
  • Mga pagbabago sa cell blastogenesis - reaksyon ng pagbabagong-anyo ng lymphocyte blast. Ang mga leukocyte ay pinatuburan ng anumang mitogen na pinagmulan ng halaman (lectins). Ang phytohemagglutinin ay kadalasang ginagamit sa loob ng 72 oras, pagkatapos ay kinukuha ang isang smear, nabahiran at binibilang ang bilang ng mga pagsabog! Ang stimulation index ay ang ratio ng porsyento ng mga nabagong selula sa eksperimento (kultura na may phytohemagglutinin) sa porsyento ng mga nabagong selula sa kontrol (kulturang walang phytohemagglutinin). Ang reaksyon ng pagbabagong-anyo ng lymphocyte blast ay maaaring masuri sa pamamagitan ng pagsasama ng isang radioactive label (ZN-thymndinum) sa mga kulturang selula, dahil ang DNA synthesis ay tumataas sa panahon ng paghahati ng cell. Ang mga kaguluhan sa proliferative response ay nangyayari sa parehong pangunahin at pangalawang immunodeficiencies na nauugnay sa mga impeksyon, kanser, pagkabigo sa bato, at mga interbensyon sa operasyon.
  • Sa mga pag-aaral na ito, ang pagpapahayag ng mga activation marker (CD25, transferrin receptor - CD71) at ang molekula ng pangunahing histocompatibility complex class II HLA-DR, na halos wala sa resting T-lymphocytes, ay tinasa. Ang mga T-lymphocytes ay pinasigla ng phytohemagglutinin, pagkatapos ng 3 araw ang pagpapahayag ng mga marker ng activation ay nasuri sa pamamagitan ng paraan ng direkta o hindi direktang reaksyon ng immunofluorescence, daloy ng cytofluorometry, gamit ang monoclonal antibodies sa mga nakahiwalay na receptor.
  • Pagsukat ng dami ng mga mediator na na-synthesize ng activated T-lymphocytes [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, γ-interferon, atbp.] gamit ang radioimmunoassay o ELISA. Ang partikular na kahalagahan ay ang pagtatasa ng konsentrasyon ng γ-interferon at IL-4 bilang mga marker ng Th1 at Th2 sa supernatant ng mga aktibong kultura at sa loob ng cell. Kung maaari, ito ay kapaki-pakinabang upang matukoy ang expression ng gene para sa kaukulang cytokine sa pamamagitan ng antas ng matrix ribonucleic acid sa producer cell at ang intensity ng pagpapahayag ng mga receptor para sa kaukulang mga cytokine.
    
• Reaksyon ng pagsugpo sa paglilipat ng lymphocyte. Ang mga sensitibong T-lymphocytes bilang reaksyon sa antigen ay naglalabas ng mga lymphokines, kabilang ang mga salik na pumipigil sa paglilipat ng lymphocyte. Ang inhibition phenomenon ay sinusunod kapag ang mitogens ay ipinakilala sa cell culture. Ang pagsusuri sa antas ng pagsugpo ay nagpapahintulot sa amin na hatulan ang kakayahan ng mga lymphocytes na mag-secrete ng mga cytokine. Karaniwan, ang dalas ng paglipat, depende sa tiyak na mitogen, ay 20-80%.
• Pagtatasa ng NK cell cytotoxicity. Natutukoy ang kakayahan ng mga natural killer cell na pumatay ng mga target na cell ng K-562 erythromyeloid line. Kung ang antibody-dependent cytotoxicity ay tinasa, ang mga target na cell na pinahiran ng IgG antibodies ay ginagamit. Ang mga target na cell ay may label na 3H-uridine at na-incubate ng mga effector cell. Ang pagkamatay ng mga target na cell ay tinasa sa pamamagitan ng paglabas ng radioactive label sa solusyon. Ang pagbawas sa cytotoxicity ay nangyayari sa mga malignant na neoplasms. Sa ilang mga kaso, kapag kinakailangan upang mahulaan ang pagiging epektibo ng paggamot na may mga interleukin, ang cytotoxicity ng mga selula ng NK ay tinasa sa panahon ng pagpapapisa ng itlog sa ilang mga cytokine.

Pag-aaral ng phagocyte function

Mga pamamaraan ng screening

Pag-aaral ng intensity ng pagsipsip ng microbial cells sa pamamagitan ng phagocytes (phagocytosis ng latex particle, test culture ng staphylococcus, E. coli o microorganisms na nakahiwalay sa pasyente). Sa pamamagitan ng centrifuging heparinized na dugo, ang isang suspensyon ng mga leukocytes ay nakahiwalay, ang serum ng IV blood group ay idinagdag para sa opsonization (opsonins ay mga protina na nagpapahusay sa phagocytosis). Ang microbial suspension ay diluted, halo-halong may leukocytes at incubated para sa 120 minuto, kumukuha ng mga sample para sa pagsusuri 30.90.120 minuto pagkatapos ng simula ng incubation. Ang mga pahid ay ginawa mula sa nakolektang leukocyte suspension. Ang mga sumusunod na tagapagpahiwatig ng phagocytosis ay tinutukoy:

• phagocytic index - ang porsyento ng mga cell na pumasok sa phagocytosis sa loob ng 30 min at 120 min ng incubation; ang karaniwang halaga ng phagocytic index (30) ay 94%, ang phagocytic index (120) ay 92%;
• phagocytic number - ang average na bilang ng mga bakterya na matatagpuan sa intracellularly; ang karaniwang halaga ng phagocytic number (30) ay 11%, ang phagocytic number (120) ay 9.8%;
• phagocytic number coefficient - ang ratio ng phagocytic number (30) sa phagocytic number (120); karaniwang 1.16;
• Neutrophil bactericidal index - ang ratio ng bilang ng mga microbes na napatay sa loob ng mga phagocytes sa kabuuang bilang ng mga microbes na hinihigop; karaniwang 66%.

Mga pamamaraan ng paglilinaw

• Pag-aaral ng kakayahan ng bactericidal ng mga phagocytes sa pagsubok na may nitroblue tetrazolium (NBT) - pagsubok sa NBT. Ang dilaw na nitroblue tetrazolium dye ay idinagdag sa mga leukocytes. Kapag ang isang neutrophil ay sumisipsip ng pangulay, ang isang proseso ng pagbabawas ay nangyayari sa ilalim ng impluwensya ng mga libreng oxygen radical, na nagreresulta sa asul na kulay. Ang reaksyon ay isinasagawa sa isang 96-well flat-bottomed plate. Ang Hanks' solution (spontaneous NBT) ay idinagdag sa unang tatlong balon na may pinaghalong NBT at leukocytes, at ang mga latex na particle ay idinagdag sa pangalawa; ang pinaghalong ay incubated sa 37 C para sa 25 min. Ang mga resulta ay binabasa sa 540 nm sa isang mambabasa at ipinahayag sa mga arbitrary na yunit. Ang stimulation coefficient (K _st ) ay kinakalkula, katumbas ng ratio ng optical density sa stimulated wells sa average na optical density sa mga balon na walang stimulation. Sa malusog na tao, ang NBT _spont = 90 ± 45 CU, NBT _stim = 140 ± 60 CU. K _st = 1.78±0.36.
• Pag-aaral ng molekula ng pagdirikit. Ang flow cytofluorometry ay ginagamit upang matukoy ang pagpapahayag ng mga surface antigens CD11a/CD18, CD11b/CD18, CD11c/CD18. Ang mga immunodeficiencies na may kapansanan sa pagdirikit ay ipinakikita ng paulit-ulit na mga impeksiyon, mabagal na paggaling ng sugat, at ang kawalan ng nana sa foci ng impeksiyon.

Pag-aaral ng complement system

Mga pamamaraan ng screening

Ang pagpapasiya ng hemolytic activity ng complement ay isang pag-aaral ng classical pathway ng complement activation. Ang iba't ibang mga dilution ng serum mula sa isang may sakit at malusog na tao ay idinagdag sa ram erythrocytes na pinahiran ng mga antibodies. Ang yunit ng aktibidad ng hemolytic ay ang kapalit ng serum dilution kung saan ang 50% ng mga erythrocytes ay nawasak. Ang antas ng hemolysis ay tinatantya ng photometrically sa pamamagitan ng paglabas ng hemoglobin sa solusyon. Ang pagbaba sa hemolytic na aktibidad ng pandagdag ay sinusunod sa systemic lupus erythematosus na may pinsala sa bato, talamak na glomerulonephritis, pinagsamang immunodeficiencies, myasthenia, viral hepatitis, lymphomas, isang pagtaas - sa obstructive jaundice, Hashimoto's thyroiditis, rayuma, rheumatoid arthritis, nodular periarteritis. dermatomyositis, myocardial infarction, ulcerative colitis, Reiter's syndrome, gout.

Mga pamamaraan ng paglilinaw

• Pagpapasiya ng mga bahagi ng pandagdag. Ang quantitative determination ay ginagawa sa pamamagitan ng radial immunodiffusion at nephelometry.
  Ang pag-aaral ay hindi nagbibigay-kaalaman maliban kung ang mga antigenic na katangian ng mga bahagi ng pandagdag ay binago.
• Ito ay itinatag na ang Clq na bahagi ng pandagdag ay nagpapahusay sa phagocytosis at namamagitan sa cellular cytotoxicity. Ang pagbaba nito ay nangyayari sa mga immune complex na sakit, systemic lupus erythematosus, purulent na impeksyon at mga tumor.
• Ang bahagi ng C3 ay kasangkot sa pag-activate ng mga klasikal at alternatibong mga landas na pandagdag. Ang pagbaba sa konsentrasyon nito ay nauugnay sa mga talamak na impeksyon sa bacterial at fungal, ang pagkakaroon ng mga nagpapalipat-lipat o tissue immune complex.
• Ang bahagi ng C4 ay kasangkot sa pag-activate ng klasikal na landas. Ang pagbawas sa konsentrasyon nito ay nauugnay sa matagal na pag-activate ng pandagdag ng mga immune complex at pagbaba sa konsentrasyon ng C1 inhibitor, na kumokontrol sa pag-activate ng classical na complement pathway. Ang kakulangan ng C4 ay nangyayari sa systemic lupus erythematosus, ang pagtaas ng C4 ay nangyayari sa sakit sa bato, pagtanggi sa transplant, matinding pamamaga, at mga sakit sa gastrointestinal.
• Ang C5a ay isang maliit na fragment ng molekula ng C5, na nahati mula dito bilang resulta ng pag-activate ng sistema ng pandagdag. Tumataas ang konsentrasyon nito sa panahon ng pamamaga, sepsis, atopic at allergic na sakit.
• Ang Cl-inhibitor ay isang multifunctional factor. Kinokontrol nito ang activation ng complement component C1, inhibits ang aktibidad ng kallikrein, plasmin at activated Hageman factor, Cls at Or protease. Ang kakulangan ng C1-inhibitor ay humahantong sa angioedema.
• functional na pag-aaral ng pandagdag. Ang test serum ay idinagdag sa isang karaniwang serum na kulang sa anumang bahagi ng pandagdag at ang hemolytic na aktibidad ng pandagdag ay tinutukoy. Kung ang aktibidad ng hemolytic ay hindi naibalik sa normal, ang aktibidad ng complement component na ito sa test serum ay itinuturing na nabawasan.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]