Confocal lifetime microscopy ng cornea

Ang confocal microscopy ng cornea ay isa sa mga modernong pamamaraan ng pananaliksik; nagbibigay-daan ito para sa intravital monitoring ng cornea na may tissue visualization sa cellular at microstructural level.

Ang pamamaraang ito, dahil sa orihinal na disenyo ng mikroskopyo at ang mataas na kapangyarihan ng paglutas nito, ay nagbibigay-daan sa paggunita ng buhay na tissue ng corneal, pagsukat ng kapal ng bawat layer nito, at pagtatasa ng antas ng mga morphological disorder.

Ang layunin ng corneal confocal microscopy

Upang makilala ang mga pagbabago sa morphological ng kornea na nangyayari sa iba't ibang mga nagpapaalab at dystrophic na sakit, pati na rin bilang isang resulta ng mga interbensyon sa kirurhiko at pagkakalantad sa CL.

Ang data ng pagsusuri sa morpolohiya ay kinakailangan upang masuri ang kalubhaan ng proseso ng pathological, ang pagiging epektibo ng paggamot at upang matukoy ang mga taktika ng pamamahala ng pasyente.

Mga pahiwatig para sa pamamaraan

• Mga nagpapaalab na sakit ng kornea ( keratitis ).
• Dystrophic na sakit ng kornea ( keratoconus, Fuchs dystrophy, atbp.).
• Dry eye syndrome.
• Mga kondisyon pagkatapos ng mga surgical intervention sa kornea (penetrating corneal transplant, keratorefractive surgeries).
• Mga kondisyong nauugnay sa pagsusuot ng contact lens.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Paghahanda

Ang pagsusuring ito ay maaaring isagawa nang walang paggamit ng anesthetics. Ang isang patak ng immersion liquid ay inilalagay sa object lens ng confocal microscope. Tinatanggal nito ang direktang kontak ng lens sa kornea at pinapaliit ang panganib ng pinsala sa epithelium.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Pamamaraan confocal microscopy ng kornea.

Isinasagawa ang pag-aaral gamit ang ConfoScan 4 (Nider) confocal microscope na may magnification na 500 beses. Ang aparato ay nagpapahintulot sa kornea na masuri sa buong kapal nito.

Ang laki ng napagmasdan na lugar ay 440 × 330 μm, ang kapal ng layer ng pag-scan ay 5 μm. Ang lens na may isang patak ng gel ay dinadala sa kornea hanggang sa ito ay hawakan at mai-install upang ang kapal ng immersion liquid layer ay 2 mm. Ang disenyo ng aparato ay nagbibigay-daan sa pagsusuri sa kornea sa gitnang zone at sa mga paracentral na lugar nito.

Contraindications sa procedure

Ang isang kamag-anak na kontraindikasyon ay matinding pangangati sa mata dahil sa isang matinding proseso ng pamamaga.

[ 10 ], [ 11 ]

Normal na pagganap

Normal na morphological na larawan ng kornea

Ang anterior epithelium ay binubuo ng 5-6 na layer ng mga cell. Ang average na kapal ng buong epithelium ay humigit-kumulang 50 µm. Ayon sa morphological structure, ang mga sumusunod na layer ay nakikilala (mula sa loob palabas): basal, awl-shaped na mga cell at mababaw.

• Ang pinakaloob (basal) na layer ay kinakatawan ng maliit, siksik, cylindrical na mga cell na walang nakikitang nucleus. Ang mga hangganan ng mga basal na selula ay malinaw at maliwanag.
• Ang gitnang layer ay binubuo ng 2-3 layer ng spiny (winged) cells na may malalim na invaginations kung saan naka-embed ang outgrowths ng mga kalapit na cell. Sa mikroskopiko, ang mga hangganan ng cell ay medyo malinaw na nakikilala, at ang nuclei ay maaaring hindi matukoy o maaaring hindi malinaw.
• Ang mababaw na layer ng epithelium ay kinakatawan ng isa o dalawang layer ng polygonal cells na may malinaw na mga hangganan at homogenous density. Ang nuclei ay karaniwang mas maliwanag kaysa sa cytoplasm, kung saan ang isang perinuclear dark ring ay maaari ding makilala.

Kabilang sa mga selula ng mababaw na layer, ang madilim at liwanag na mga selula ay nakikilala. Ang pagtaas ng reflectivity ng mga epithelial cells ay nagpapahiwatig ng pagbaba sa kanilang metabolic rate at ang kanilang simula ng desquamation.

Ang lamad ng Bowman ay isang transparent na istraktura na hindi sumasalamin sa liwanag, kaya karaniwang imposibleng mailarawan ito gamit ang confocal microscopy.

Ang subbasal nerve plexus ay matatagpuan sa ilalim ng lamad ng Bowman. Karaniwan, ang mga nerve fibers ay lumilitaw bilang mga maliliwanag na guhit na tumatakbo parallel sa isang madilim na background, na nakikipag-ugnayan sa isa't isa. Ang pagninilay (reflectivity) ay maaaring hindi pantay sa kahabaan ng hibla.

Sinasakop ng corneal stroma ang 80 hanggang 90% ng kapal ng cornea at binubuo ng mga cellular at extracellular na bahagi. Ang mga pangunahing elemento ng cellular ng stroma ay mga keratocytes; bumubuo sila ng humigit-kumulang 5% ng volume.

Ang isang tipikal na mikroskopikong larawan ng stroma ay kinabibilangan ng ilang maliwanag na hindi regular na hugis-itlog na mga katawan (keratocyte nuclei) na nasa kapal ng isang transparent na dark grey o black matrix. Karaniwan, imposible ang visualization ng mga extracellular na istruktura dahil sa kanilang transparency. Maaaring nahahati ang stroma sa mga sublayer: anterior (matatagpuan nang direkta sa ilalim ng lamad ng Bowman at bumubuo ng 10% ng kapal ng stroma), anterior-gitna, gitna, at posterior.

Ang average na density ng keratocytes ay mas mataas sa anterior stroma, unti-unting bumababa patungo sa posterior layers. Ang density ng anterior stromal cells ay halos dalawang beses na mas mataas kaysa sa posterior stromal cells (kung ang density ng anterior stromal cells ay kinuha bilang 100%, ang density ng posterior stromal cells ay magiging tungkol sa 53.7%). Sa anterior stroma, ang nuclei ng keratocytes ay may isang bilugan na hugis ng bean, habang sa posterior stroma sila ay hugis-itlog at mas pinahaba.

Maaaring mag-iba ang liwanag ng keratocyte nuclei. Ang iba't ibang kakayahang magpakita ng liwanag ay depende sa kanilang metabolic state. Ang mas maliwanag na mga cell ay itinuturing na mga activated keratocytes ("stress" cells), na ang aktibidad ay naglalayong mapanatili ang panloob na homeostasis ng kornea. Sa norm at visual field, matatagpuan ang mga single activated cell.

Ang mga nerve fibers sa anterior corneal stroma ay nakikita bilang maliwanag na homogenous na banda, na kadalasang bumubuo ng mga bifurcations.

Ang lamad ng Descemet ay karaniwang transparent at hindi nakikita ng confocal microscopy.

Ang posterior epithelium ay isang monolayer ng hexagonal o polygonal flat cells na may pare-parehong liwanag na ibabaw laban sa isang background ng malinaw na madilim na intercellular na mga hangganan.

Ang aparato ay may kakayahang manu-mano o awtomatikong kalkulahin ang density ng cell, ang kanilang lugar at koepisyent ng pagkakaiba-iba.

Mga pagbabago sa pathological sa istraktura ng kornea

Ang Keratoconus ay nailalarawan sa pamamagitan ng mga makabuluhang pagbabago sa anterior epithelium at stroma ng kornea.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]