Pagsasaliksik sa Immunological sa urology

Ang pagtatalaga ng isang immunogram sa isang urolohiyang pasyente ay nangangahulugan na ang dumadalo na manggagamot ay ipinapalagay ang pagkakaroon ng mga abala sa immune system. Doblehin bacterial, viral, fungal impeksyon, allergy reaksyon, systemic sakit ay maaaring maging sintomas ng mga sakit, na kung saan ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang bilang ng mga syndromes (impeksyon, kanser, allergic, autoimmune, lymphoproliferative). Ang isang pasyente ay maaaring magkaroon ng ilang mga syndromes. Halimbawa, talamak nakakahawang sakit (nakakahawang syndrome) ay maaaring maging sanhi ng immune deficiency at immune deficiency ay maaaring manifested predisposition sa mga nakakahawang sakit at kanser (Kanser Syndrome). Pagkamaramdamin sa impeksiyon ay maaaring mangyari laban sa isang background ng pangalawang immunodeficiency, na binuo dahil lymphoproliferative sakit, tulad ng lukemya. May tatlong pangunahing grupo ng mga pathological pagbabago sa immune system:

• ang dami o functional na kakulangan ng isa o ibang link ng kaligtasan sa sakit, na humahantong sa pagpapaunlad ng isang estado ng immunodeficiency;
• isang paglabag sa pagkilala ng antigen ng immune system, na humahantong sa pagpapaunlad ng mga proseso ng autoimmune;
• hyperreactive o "perverted" immune response, ipinakita sa pamamagitan ng pag-unlad ng mga allergy sakit.

May mga screening (pagsusulit ng antas 1) at mga kwalipikadong (pagsusulit ng 2 antas) na pamamaraan ng immunodiagnostics. Ang dating umiiral upang ayusin ang mga paglabag sa immune system, sa huli - upang itatag ang mga mekanismo na kasangkot sa kanilang pagpapatupad para sa layunin ng karagdagang immunocorrection.

B-Cellular link ng kaligtasan sa sakit

Mga pamamaraan sa pag-screen

• Pagpapasiya ng mga kamag-anak at ganap na bilang ng mga B-lymphocytes sa pamamagitan ng immunofluorescence o daloy cytometry gamit monoclonal antibodies sa B-cell antigens (CD19, CD20, kung saan CD - kumpol ng pagkita ng kaibhan). Ang nilalaman ng B lymphocytes sa normal na mga matatanda: 8-19% ng kabuuang mga leukocytes o 190-380 cell / ml. Ang pagtaas sa nilalaman ng B lymphocytes ay nangyayari sa talamak at talamak bacterial at fungal impeksiyon, talamak atay sakit, systemic nag-uugnay tissue sakit, talamak lymphocytic lukemya, ang maramihang myeloma.
• Pagpapasiya ng konsentrasyon ng immunoglobulins nespespetsificheskih (F, M, G, E) sa pamamagitan ng nag-iisang radial immunodiffusion, o turbometrii nephelometry, radioimmunoassay o enzyme immunoassay (EIA). Mga pamantayan para sa mga matatanda: immunoglobulin (Ig) Isang 0.9-4.5 g / l. IgM 03-3.7 g / l. IgG 8.0-17 g / l. Pagtaas ng konsentrasyon ng immunoglobulins ay nangyayari sa parehong pathological kondisyon para sa kung saan ang pagtaas sa ang nilalaman ng B lymphocytes ay nangyayari. Pagbabawas ng konsentrasyon ng immunoglobulins ay nasa congenital hypogammaglobulinemia, mga bukol ng immune system, pag-alis ng pali, protina pagkawala, sa sakit ng bato o bituka, paggamot na may cytostatics at immunodepreesantami.

Pagtutukoy ng mga pamamaraan

• Ang pagpapasiya ng mga circulating immune complex sa dugo sa pamamagitan ng pumipili ng ulan sa polysilene glycol na sinusundan ng spectrophotometric density testing (normal 80-20 UE). Ang pagtaas ng circulating immune complexes ay katangian para sa talamak na bacterial, fungal, impeksyon sa viral, autoimmune, immunocomplex disease, suwero pagkakasakit, allergic reaksyon ng uri 3;
• Pagpapasiya ng mga tiyak na immunoglobulins sa dugo na may kaugnayan sa bacterial at viral antigens, deoxyribonucleic acid (DNA) sa autoimmune sakit, ang pagkakakilanlan ng tamud (autoimmune kawalan ng katabaan) at protivopochechnyh antibodies (pyelonephritis at glomerulonephritis) sa pamamagitan ng radial immunodiffusion o ELISA.
• Ang pagpapasiya ng antisperm antibodies sa tamud [MAR-test (mixed antiglobulin reaksyon)], ang norm ay negatibo.
• Pagpapasiya ng konsentrasyon ng immunoglobulins sa ihi para sa layunin ng pagkakaiba sa diagnosis sa pagitan ng pyelonephritis at glomerulonephritis (selectivity ng proteinuria).
• Pagpapasiya ng IgE sa prostate juice para sa pagsusuri ng allergic prostatitis sa pamamagitan ng radial immunodiffusion o ELISA. 
• Research bilang tugon blasttransformation reaksyon ng mga lymphocytes B sa isang B-cell mitogen (Pokeweed mitogen para sa pagbibigay-buhay ng blasttransformation reaksyon ng B-lymphocyte sa presensya ng T-lymphocytes), kung saan ang standard na halaga ng 95-100%.

T-cell na link ng kaligtasan sa sakit

Mga pamamaraan sa pag-screen

• Pagpapasiya ng mga kamag-anak at ganap na bilang ng mga mature CD3 T lymphocyte reaksyon sa pamamagitan ng immunofluorescence o daloy cytofluorometry gamit ang anti-SDZ monoclonal antibodies. Ang pamantayan para sa mga may sapat na gulang ay 58-76% o 1100-1700 cells / μl. Bawasan ang bilang ng T-lymphocyte kabiguan indicator cell kaligtasan sa sakit. Ito ang katangian ng ilang mga secondary at primary immunodeficiencies (talamak bacterial at viral impeksiyon: tuberculosis, acquired immune deficiency syndrome, kanser, talamak ng bato kabiguan, trauma, stress, pag-iipon, malnutrisyon, paggamot na may cytotoxic gamot, ionizing radiation). Ang pagtaas ng bilang ng mga T-lymphocytes ay laban sa background ng immune hyperactivity o lymphoproliferative sakit. Kapag pamamaga ng ang bilang ng T-lymphocytes ay unang itinaas at pagkatapos ay binabaan. Walang pagbaba sa T-lymphocytes ay nagpapahiwatig talamak pamamaga.
• Pagtatasa ng mga subpopulasyon ng mga lymphocytes.
  • Pagpapasiya ng bilang ng mga T-helpers (anti-CD4 antibody). Karaniwan, 36-55% o 400-1100 cells / μl. Ang pagtaas ng bilang ng mga cell na ito ay nangyayari sa autoimmune sakit, ni Waldenstrom sakit, immune activation antitransplantatsionnogo; pagbawas sa ang bilang ng mga cell T-helper ay nangyayari sa talamak bacterial, viral, protozoal impeksiyon, tuberculosis, acquired immune deficiency syndrome, malignancies, Burns, trauma, malnutrisyon, pag-iipon, cytostatics paggamot, ionizing radiation.
  • Pagpapasiya ng bilang ng mga T-suppressor (anti-CD4 antibody). Karaniwan, 17-37% o 300-700 cells / μl. Tumaas na bilang ng suppressor T nangyayari sa ilalim ng parehong kundisyon kung saan nabawasan ang bilang ng mga cell T-helper at ang kanilang mga pagbabawas sa ilalim ng parehong mga kondisyon sa ilalim kung saan ang nilalaman ng T-helper cells ay nagtataas.
  • Immunoregulatory index CD4 / CD8, sa pamantayan 1,5-2,5. Hyperactivity sa mga rate ng higit sa 2.5 (allergy at autoimmune sakit); hypoactivity - mas mababa sa 1.0 (predisposition sa malalang impeksiyon). Sa simula ng proseso ng nagpapaalab, ang immunoregulatory index ay tumataas, at kapag ito ay nahuhulog, normalize ito.

Pagtutukoy ng mga pamamaraan

• Pagpapasiya ng ang bilang ng mga natural killer cells (NK-cell) - anti-CD16- at anti-SD56 antibodies. Ang mga pamantayan para sa CD 16 lymphocytes ay 6-26%, CD56 - 9-19%. Ang pagtaas ng bilang ng mga NK-cell nangyayari sa pangunguwalta pagtanggi, bawasan - sa viral impeksyon, kanser, pangunahin at pangalawang immunodeficiencies, Burns, trauma at stress, paggamot na may cytostatics at ionizing radiation. 
• Ang pagpapasiya ng bilang ng mga T-lymphocytes na may receptor para sa interleukin-2 (activation marker) - anti-CD25 antibodies. Ang pamantayan ay 10-15%. Ang pagtaas sa kanilang mga numero ay na-obserbahan sa allergic sakit, transplant pagtanggi, bilang tugon sa thymus-umaasa antigens sa panahon ng talamak pangunahing impeksiyon, ang pagbabawas - sa ilalim ng parehong sakit, na kung saan kasangkot ang pagbabawas ng bilang ng NK-cell.
• Examination ng pagpapahayag ng marker ng pagsasaaktibo - ang histocompatibility molekula ng klase II HLA-DR. Ang nadagdag na pananalita ay nangyayari sa mga nagpapasiklab na proseso, sa mga pasyente na may hepatitis C, sakit sa celiac, syphilis, mga impeksiyon sa matinding paghinga.
• Pagsusuri ng apoptosis ng mga lymphocytes. Isang indikasyon ng kahandaan ng lymphocyte apoptosis ay maaaring makilala sa pamamagitan ng kanilang pagpapahayag ng surface Fas-receptor (CD95) sa mitochondria at bd-2 protooncogene. Apoptosis ay nasuri ng lymphocyte processing dalawang fluorescent dyes: propidium yodido, na kung saan binds sa mga fragment DNA at annexin Y, nagbubuklod na phosphatidylserine sa cell membrane na lumilitaw sa unang bahagi ng apoptosis. Ang ebalwasyon ng mga resulta ay isinasagawa sa isang daloy ng cytofluorimeter. Ang pagkalkula ng mga resulta ay batay sa ratio ng mga cell na marumi na may iba't ibang mga tina. Walang bahid cell ay viable cell, kaugnay lamang sa pamamagitan annexin ang Y, - maagang palatandaan ng apoptosis, na may propidium yodido at annexin I - late manifestations ng apoptosis, paglamlam lamang propidium yodido ay nagpapahiwatig nekrosis.
• Pagsusuri ng paglaganap ng mga T-lymphocyte sa vitro.
  • Ang pagbabago sa cell blastogenesis ay isang reaksyon ng pagbabagong-anyo ng mga lymphocytes. Ang mga leukocyte ay incubated sa anumang mitogen ng pinagmulan ng halaman (lectins). Mas karaniwang ginagamit phytohemagglutinin para sa 72 na oras, pagkatapos ay gumawa ng isang pahid, mantsa ito at bilangin ang bilang ng mga blasts! Ang stimulating index ay ang ratio ng porsyento ng mga transformed cells sa eksperimento (kultura na may phytohemagglutinin) sa porsyento ng mga transformed cells sa control (kultura na walang phytohemagglutinin). Ang reaksyon ng pagbabagong-anyo ng mga lymphocytes ay maaaring masuri sa pamamagitan ng pagsasama ng isang radioactive label (ZN-thymdin) sa mga pinag-aralang mga selula, dahil ang pagtao ng synthesis ng DNA ay nagpapataas kapag naghahati ng mga selula. Ang mga kaguluhan sa proliferative response ay nagaganap sa primary at sekundaryong immunodeficiencies na nauugnay sa mga impeksiyon, mga sakit sa oncolohiko, kakulangan ng bato, at mga operasyon sa kirurhiko.
  • Pagsusuri ng mga pag-aaral, ang expression ng mga marker activation (CD25, transferrin receptor sa - CD71) molecule at ang MHC class II HLA-DR, na kung saan ay malaki-laking absent sa nagpapahinga T-lymphocytes. T lymphocytes stimulated sa phytohemagglutinin pagkatapos ng 3 araw expression activation markers ay sinusuri ng direkta o hindi direktang immunofluorescence, daloy cytometry gamit monoclonal antibodies secreted receptors.
  • Pagsukat sa dami ng mga tagapamagitan synthesized sa pamamagitan ng activate T lymphocytes [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, at iba pa], Sa pamamagitan ng radioimmunoassay o ELISA. Lalo na mahalaga ang pagsusuri ng konsentrasyon ng y-interferon at IL-4 bilang marker ng TH at Th2 sa supernatant ng mga kina-activate na kultura at sa loob ng cell. Kung maaari, ito ay kapaki-pakinabang upang matukoy ang expression ng gene para sa mga kaugnay cytokine pamamagitan ng ang antas ng mga sugo ribonucleic acid sa threonine paggawa ng cell at receptor expression intensities para sa kani-kanilang mga cytokines.
    
• Ang reaksyon ng pagsugpo ng paglilipat ng mga lymphocytes. Sensitized T-lymphocytes sa reaksyon sa lymphokines release ng antigen, kabilang ang mga kadahilanan. Inhibiting ang migration ng lymphocytes. Ang kababalaghan ng pagsugpo ay sinusunod kapag ang mga mitogens ay ipinakilala sa kultura ng mga selula. Ang pagsusuri ng antas ng pagsugpo ay posible upang hatulan ang kakayahan ng mga lymphocytes na magpalabas ng mga cytokine. Karaniwan, ang dalas ng paglipat, depende sa tukoy na mitogen, ay 20-80%.
• Pagsusuri ng cytotoxicity ng NK cells. Tukuyin ang kakayahan ng mga natural killer cells upang patayin ang mga target cells ng erythromyeloid line K-562. Kung sinusuri ang cytotoxicity na umaasa sa antibody, ang mga target na selula na pinahiran ng mga antibodies ng IgG ay ginagamit. Ang mga target na selula ay may label na may 3H-uridine at incubated na may mga effector cells. Ang pagkamatay ng mga target cell ay tinatantya mula sa paglabas ng radioactive na label sa solusyon. Ang pagbawas ng cytotoxicity ay nangyayari sa mga malignant neoplasms. Sa ilang mga kaso, kapag ang isang pagbabala ng pagiging epektibo ng paggamot na may interleukins ay kinakailangan, ang cytotoxicity ng mga NK cell ay sinusuri kapag inkubated sa ilang mga cytokines.

Pagsisiyasat ng pag-andar ng mga phagocyte

Mga pamamaraan sa pag-screen

Pagsipsip intensity phagocytes Pag-aaral ng mga microbial mga cell (phagocytosis ng LaTeX particle, pagsubok kultura aureus, Escherichia coli, o microorganisms ihiwalay mula sa mga pasyente). Sa pamamagitan ng centrifuging heparinized dugo leukocytes mababawi slurry ay naidagdag serum IV dugo para opsonization (opsonins - protina na mapahusay ang phagocytosis). Ang microbial suspension ay sinipsip, halo-halong leukocytes at incubated para sa 120 min, sampling para sa pagtatasa pagkatapos ng 30.90.120 min matapos ang pagsisimula ng pagpapapisa ng itlog. Ang mga napiling leukocyte na pagsususpinde ay gumawa ng smears. Tukuyin ang mga sumusunod na tagapagpahiwatig ng phagocytosis:

• phagocytic index - ang porsyento ng mga selula na pumasok sa phagocytosis sa 30 min at 120 min na pagpapapisa ng itlog; normatibong halaga ng phagocytic index (30) 94% ng phagocytic index (120) - 92%;
• phagocytic number - ang average na bilang ng bakterya na intracellular; ang normatibong halaga ng phagocytic number (30) 11%, phagocytic number (120) - 9.8%;  
• koepisyent ng phagocytic number - ratio ng phagocytic number (30) sa phagocytic number (120); normal 1.16;
• ang bactericidal index ng neutrophils ay ang ratio ng bilang ng mga microbes na pinatay sa loob ng phagocytes sa kabuuang bilang ng mga mikrobyo na kinuha; sa pamantayan ng 66%.

Pagtutukoy ng mga pamamaraan

• Ang pagsisiyasat ng aktibidad ng bactericidal ng mga phagocyte sa pagsusulit sa nitrosine tetrazolium (NST) ay ang NST test. Sa mga leukocytes, ang dye ng nitrous tetrazolium yellow ay idinagdag. Kapag ang tina ay hinihigop ng neutrophil, ang proseso ng pagbabawas ay nagaganap sa ilalim ng pagkilos ng mga libreng radicals ng oxygen, na nagreresulta sa isang asul na paglamlam. Ang reaksyon ay isinasagawa sa isang 96-well flat-bottomed plate. Sa unang tatlong balon na may isang halo ng HCT at leukocytes, ang Hanks solution (kusang HCT) ay idinagdag, sa huli na mga particle ng latex; itapon sa 37 ° C sa loob ng 25 minuto. Ang mga resulta ay binabasa sa 540 nm sa mambabasa at ipinahayag sa mga maginoo na yunit. Kalkulahin ang kadahilanan ng pagpapasigla (K _st ), katumbas ng ratio ng optical density sa stimulated wells sa average na optical density sa mga balon nang walang pagbibigay-buhay. Sa mga malusog na tao, ang _{HCT ay umabot sa} 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1.78 ± 0.36.
• Pagsisiyasat ng mga molecule ng adhesion. Sa tulong ng daloy ng cytofluorimetry, ang pagpapahayag ng antigens sa ibabaw na CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ay natutukoy. Ang mga immunodeficiencies na may paglabag sa pagdirikit ay ipinakita sa pamamagitan ng pag-relaps sa mga impeksiyon, mabagal na pagpapagaling ng mga sugat at kawalan ng nana sa foci ng impeksiyon.

Pagsisiyasat ng sistemang pampuno

Mga pamamaraan sa pag-screen

Pagpapasiya ng hemolytic activity ng pampuno - isang pag-aaral ng klasiko landas ng pampuno activation. Ang iba't ibang mga pagsipsip ng suwero ng pasyente at isang malusog na tao ay idinagdag sa mga erythrocyte ng isang ram na sakop ng antibodies. Ang isang yunit ng hemolytic activity ay kinuha bilang kabaligtaran ng pagbabanto ng suwero, kung saan 50% ng mga erythrocytes ay nawasak. Ang antas ng hemolysis ay nasuri na photometrically sa pamamagitan ng ani ng hemoglobin sa solusyon. Ang pagbawas ng hemolytic activity ng pampuno ay sinusunod sa systemic lupus erythematosus na may paglahok ng bato, talamak na glomerulonephritis. Pinagsamang immunodeficiencies, myasthenia gravis, viral hepatitis, lymphomas, pagtaas - na may nakahahawa na paninilaw ng dugo, thyroiditis Hashimoto. Rheumatism, rheumatoid arthritis, nodular periarteritis. Dermatomyositis, myocardial infarction, ulcerative colitis, Reiter's syndrome, gout.

Pagtutukoy ng mga pamamaraan

• Pagpapasiya ng mga pandagdag na bahagi. Ang dami ng pagpapasiya ay isinasagawa sa pamamagitan ng paraan ng radikal na immunodiffusion at nephelometry.
  Ang pag-aaral ay hindi nakapagtuturo, maliban kung ang mga antigenikong pag-aari ng mga pandagdag na bahagi ay nabago.
• Ito ay natagpuan na ang Clq-component ng pampuno ay nakakakuha ng phagocytosis at namamagitan sa cellular cytotoxicity. Ang pagbawas nito ay nangyayari sa mga sakit ng mga immune complex, systemic lupus erythematosus, purulent infection at tumor.
• Ang C3-component ay nakikilahok sa pag-activate ng klasikal at alternatibong landas ng pangkat. Ang pagbawas ng konsentrasyon nito ay nauugnay sa mga impeksiyon ng talamak na bacterial at fungal, ang pagkakaroon ng mga circulating o tissue immune complexes.
• Lumahok ang bahagi ng C4 sa pag-activate ng klasikal na landas. Pagbawas kanyang concentration na nauugnay sa matagal na pag-activate ng pampuno at immune complexes mababawasan ang C1 inhibitor concentration-pagkontrol ng pag-activate ng mga klasikal na pampuno pathway. Ang kakulangan ng C4 ay nangyayari sa systemic lupus erythematosus, isang pagtaas sa C4 ay nangyayari sa sakit sa bato, pagtanggi sa transplant, talamak na pamamaga, at mga sakit ng gastrointestinal tract.
• Ang C5a ay isang maliit na fragment ng C5 molecule, na nahiwalay mula dito dahil sa pag-activate ng complement system. Ang pagtaas sa konsentrasyon nito ay nangyayari sa pamamaga, sepsis, atopic at allergic diseases.
• Cl-inhibitor ay isang multifunctional factor. Kinokontrol nito ang pag-activate ng bahagi ng C1 ng pandagdag, inhibits ang aktibidad ng kallikrein, plasmin at activate factor Hageman, proteases Cls at Or. Ang kakulangan ng C1-inhibitor ay humantong sa angioedema.
• mga pantulong na pag-aaral. Sa standard serum na kulang sa anumang komplikadong bahagi, ang test serum ay idinagdag at ang hemolytic activity ng complement ay tinutukoy. Kung ang hemolytic activity ay hindi naibalik sa normal, pinaniniwalaan na ang aktibidad ng komplikadong bahagi na ito sa serum ng pagsubok ay nabawasan.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]