Confocal intravital microscopy ng cornea

Ang confocal microscopy ng cornea ay isa sa mga modernong pamamaraan ng pagsisiyasat; ay nagbibigay-daan upang magsagawa ng intravital monitoring ng estado ng cornea na may visualization ng tisyu sa antas ng cellular at microstructural.

Ang pamamaraang ito, dahil sa orihinal na disenyo ng mikroskopyo at mataas na resolusyon nito, ay nagpapahintulot sa visualization ng mga nabubuhay na mga tisyu ng corneal, upang masukat ang kapal ng bawat layer nito, at upang masuri ang antas ng morpolohiya na mga kaguluhan.

Ang layunin ng confocal microscopy ng cornea

Iguguhit ang mga pagbabago sa morpolohiya sa kornea, na nagmumula sa iba't ibang mga nagpapaalab at dystrophic na sakit, pati na rin sa mga operasyon ng kirurhiko at mga epekto ng CR.

Ang morpolohiya data ay kinakailangan upang masuri ang kalubhaan ng proseso ng pathological, ang pagiging epektibo ng paggamot at tukuyin ang mga taktika ng pamamahala ng pasyente.

Mga pahiwatig para sa pamamaraan

• Nagpapaalab na sakit ng kornea ( keratitis ).
• Dystrophic na sakit ng kornea ( keratoconus, Fuchs's dystrophy, atbp.).
• Syndrome ng "dry eye".
• Kundisyon pagkatapos ng mga operasyon ng kirurhiko sa kornea (sa pamamagitan ng paglipat ng corneal, keratorefractive operations).
• Mga kondisyon na nauugnay sa may suot na contact lenses.

[1], [2], [3], [4]

Paghahanda

Ang pag-aaral na ito ay posible nang hindi gumagamit ng anesthetics. Ang isang drop ng paglulubog likido ay inilagay sa lens ng confocal mikroskopyo lens. Tinatanggal nito ang direktang kontak ng lens sa kornea at pinabababa ang panganib ng epithelial damage.

[5], [6], [7], [8], [9],

Pamamaraan confocal microscopy ng cornea

Ang pag-aaral ay isinagawa sa confocal microscope na ConfoScan 4 (Nider) na may isang pagtaas ng 500 beses. Pinapayagan ka ng aparato na suriin ang cornea sa buong kapal nito.

Ang sukat ng nasisiyasat na zone ay 440 × 330 μm, ang kapal ng layer ng pag-scan ay 5 μm. Ang isang lens na may isang drop ng gel ay dinala sa kornea upang hawakan at itakda upang ang kapal ng pagsasawsaw na likido layer ay 2 mm. Ang disenyo ng aparato ay nagpapahintulot sa iyo na suriin ang kornea sa central zone at ang mga paracentral area nito.

Contraindications sa procedure

Ang kaugnay na contraindication ay minarkahan ng pangangati ng mata laban sa background ng isang matinding proseso ng nagpapasiklab.

[10], [11]

Normal na pagganap

Normal na morphological larawan ng kornea

Ang anterior epithelium ay binubuo ng 5-6 layers ng mga selula. Ang average na kapal ng buong epithelium ay humigit-kumulang na 50 μm. Ayon sa morphological structure, ang mga sumusunod na layer ay nakikilala (mula sa loob papalabas): basal, subulate at mababaw.

• Ang panloob (basal) layer ay kinakatawan ng maliit na siksik na cylindrical na mga cell na walang nakikitang nucleus. Ang mga hangganan ng basal cell ay malinaw, maliwanag.
• Ang gitnang layer ay binubuo ng 2-3 layers ng mga hugis na may hugis ng spinal (may pakpak) na may malalim na mga invaginations, kung saan ang mga outgrowth ng kalapit na mga cell ay binuo. Sa mikroskopiko, ang mga hangganan ng cell ay medyo mahusay na maaaring maliwanagan, at ang nuclei ay hindi maaaring tinukoy o malabo.
• Ang ibabaw na layer ng epithelium ay kinakatawan ng isa o dalawang layers ng mga polygonal cell na may malinaw na mga hangganan at isang homogenous density. Ang nuclei ay karaniwang mas maliwanag kaysa sa cytoplasm, kung saan maaari ring makilala ang isang malapit na nucleus dark ring.

Kabilang sa mga selula ng layer ng ibabaw ay nakikilala sa pagitan ng madilim at ilaw. Ang mas mataas na reflectivity ng epithelial cells ay nagpapahiwatig ng pagbawas sa antas ng metabolismo sa kanila at sa simula ng kanilang desquamation.

Ang Bowman membrane ay isang transparent na istraktura na hindi sumasalamin sa liwanag, kaya imposible upang maisalarawan ito kapag ginanap ang confocal microscopy.

Ang subbasic nerve plexus ay matatagpuan sa ilalim ng lamad ng Bowman. Karaniwan, ang mga ugat ng nerve ay mukhang maliwanag na mga piraso na tumatakbo nang magkapareho sa madilim na background, na nakikipag-ugnay sa bawat isa. Ang pagmumuni-muni (reflectivity) ay maaaring hindi pantay sa haba ng hibla.

Ang stroma ng cornea ay sumasaklaw sa 80 hanggang 90% ng kapal ng kornea at binubuo ng isang cellular at extracellular component. Ang mga pangunahing cellular elemento ng stroma ay keratocytes; bumubuo ng humigit-kumulang 5% ng lakas ng tunog.

Ang isang karaniwang mikroskopiko pattern ng stroma kasama ang ilang mga maliwanag na irregular hugis-hugis katawan (keratocyte nuclei) na kasinungalingan sa kapal ng isang transparent madilim na kulay-abo o itim na matris. Karaniwan, imposible ang visualization ng mga ekstraselyular na istruktura dahil sa kanilang transparency. Ang stroma ay maaaring kondisyon na nahahati sa mga sublayer: nauuna (matatagpuan direkta sa ilalim ng Bowman lamad at bumubuo ng 10% ng kapal ng stroma), nauuna, gitna at puwit.

Ang average na densidad ng mga keratocytes ay mas mataas sa nauuna na stroma, unti-unti na bumababa ang kanilang bilang patungo sa mga posterior na hulihan. Nauuna stromal cell density halos dalawang beses na mas mataas kaysa sa rear stromal cell (kung ang density ng cell ng nauuna stroma kinuha bilang 100%, pagkatapos ay ang density ng rear paligid 53.7% ng mga cells). Sa nauuna na stroma, ang nuclei ng keratocytes ay may hugis na hugis ng bean, at sa hugis ng oval at mas mahaba.

Ang nuclei ng keratocytes ay maaaring magkaiba sa liwanag. Ang iba't ibang kakayahang sumalamin sa liwanag ay depende sa kanilang metabolic state. Ang mas maliwanag na mga selula ay itinuturing na isinaaktibo na mga keratocytes ("mga cell ng stress"), na ang mga gawain ay naglalayong mapanatili ang panloob na homeostasis ng corneal. Sa pamantayan at larangan ng pagtingin, may mga single activated cells.

Ang mga nerve fibers sa nauunang stroma ng kornea ay nakikita bilang maliwanag na magkakaibang mga banda, na kadalasang bumubuo ng mga bifurcation.

Ang descemet membrane ay karaniwang transparent at hindi nakikita ng confocal microscopy.

Ang posterior epithelium ay isang monolayer ng hexagonal o polygonal flat cells na may unipormeng ilaw ibabaw laban sa isang background ng mga natatanging dark intercellular na mga hangganan.

Ang aparato ay nagbibigay ng posibilidad ng manu-mano o awtomatikong pagkalkula ng densidad ng cell, ang kanilang lugar at koepisyent ng pagbabagu-bago.

Pathological pagbabago sa istraktura ng kornea

Ang Keratoconus ay nailalarawan sa pamamagitan ng makabuluhang pagbabago sa anterior epithelium at stroma ng cornea.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]